RT-qPCR Kit II langsung
Keterangan Kit:
◮Direct RT-qPCR Kit, menggunakan Foreasy Reverse Transcriptase dan Foreasy HS Taq DNA Polymerase yang dikembangkan oleh Foregene, dengan buffer reaksi yang unik, membuat kit ini memiliki ketahanan dan kompatibilitas yang kuat, dan dapat langsung menguji reaksi menggunakan sistem Foregene Lysis sebagai template.Kit ini dapat digunakan untuk kit deteksi asam nukleat COVID-19 dan pengembangan kit deteksi asam nukleat bakteri patogen lainnya.
Keterangan
Direct RT-qPCR Kit menyediakan buffer RT-qPCR yang dikemas secara terpisah, Foreasy HS Taq DNA Polymerase yang efisien tinggidan Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),membuatnya nyaman untuk pembuatan kit back-end dan penyesuaian sistem, dalam verifikasi sederhana.
Direct RT-qPCR Kit, menggunakan Foreasy Reverse Transcriptase dan Foreasy HS Taq DNA Polymerase yang dikembangkan oleh Foregene, dengan buffer reaksi yang unik, membuat kit ini memiliki ketahanan dan kompatibilitas yang kuat, dan dapat langsung menguji reaksi menggunakan sistem Foregene Lysis sebagai template.Kit ini dapat digunakan untuk kit deteksi asam nukleat COVID-19 dan pengembangan kit deteksi asam nukleat bakteri patogen lainnya.
Kit ini bisa langsung menjadi komponen produk IVD, pemakaiannya mudah dan cepat.Hanya perlu verifikasi yang mudah, tanpa mengembangkan lagi.
Spesifikasi
500T, 50.000T
Komponen kit
| Isi kit (sistem reaksi 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 µL×1 | 1 mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 mL×10 |
| 2× RT-qPCR LangsungPenyangga | 1 mL ×5 | 500 mL ×1 |
| Petunjuk | 1 | 1 |
Langkah Operasi
A: Siapkan template dan reagen
1. Siapkan template RNA yang sudah disiapkan (Disarankan untuk menggunakan kit seri Foregene Total RNA Isolation Kit untuk mengekstraksi dan memurnikan template RNA) atau sampel produk perengkahan (Disarankan untuk menggunakan sistem Foregene Lysis), primer spesifik (10 μM) dan bahan habis pakai lainnya yang relevan, instrumen.
2. Masukkan 2× Direct RT-qPCR Buffer, ddH2O Bebas RNase, dan 20× ROX Reference Dye (jika perlu) ke dalam kotak berisi es, membuatnya meleleh secara alami, dan dicampur dengan lembut.
B: Siapkan sistem RT-qPCR
Dapatkan setengah volume buffer reaksi dari sistem reaksi (misalnya, jika volume sistem adalah 20 μL, perlu mendapatkan 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Untukjumlah enzim yang sesuai, kami menyarankan ituM-MLV：10-30 U/20 μL sistem reaksi,TaqDNA polimerase：Sistem reaksi 1-2 U/20 μLini saran kami, Anda harus menguji dan menyesuaikannya), tambahkan template RNA, primer dan probe spesifik, dan tambahkan ddH Bebas RNase2O hingga 20 μL.Pembuatan spesifik sistem reaksi RT-qPCR dapat dilihat pada tabel 1 berikut.
Tabel 1 : Persiapan sistem RT-qPCR
| Komponen | Volume | Konsentrasi akhir |
| 2× Buffer RT-qPCR Langsung | 10 µL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 U | |
| Primer Maju (10 μM) | 0,8 µL | 50-900nM |
| Membalikkan Primer (10 μM) | 0,8 µL | 50-900nM |
| Penyelidikan (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Templat (RNA atau Lisat) | X µL | |
| 20× Pewarna Referensi ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) µL | |
| Jumlah Volume | 20μL |
Catatan: Forward Primer dan Reverse Primer adalah primer spesifik dari gen target.Sistem qPCR dapat disesuaikan menurut model percobaan dan PCR praktis.Kami merekomendasikan 400nM untuk konsentrasi akhir sebagian besar primer.Sesuaikan volume primer dan probe spesifik sesuai dengan konsentrasi yang disiapkan dan konsentrasi akhir yang disarankan.
1*: Pilih konsentrasi akhir Pewarna Referensi ROX yang sesuai menurut instrumen PCR kuantitatif yang berbeda.Konsentrasi Pewarna Referensi ROX yang optimal dari instrumen PCR kuantitatif umum ditunjukkan pada tabel berikut:
| Instrumen PCR kuantitatif | Konsentrasi akhir Pewarna Referensi ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Langkah Pertama,dll. | 1× (misalnya, tambahkan 1μl 20×ROX Reference Dye dalam sistem reaksi 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Cepat, Stratagene Mx3000P, Mx3005P dan Mx4000, dll. | 0,5× (misalnya, tambahkan 0,5μl 20×ROX Reference Dye dalam sistem reaksi 20 μL) |
| Instrumen PCR Roche, instrumen PCR Bio-Rad, instrumen PCR kuantitatif Eppendorf, dll. | Tanpa Pewarna Referensi ROX |
Penyimpanan dan Umur simpan
Kit harus disimpan pada suhu -20 ± 5℃.Ini harus segera disimpan di -20 ℃ kulkas termostatik.Masa berlakunya adalah 2 tahun jika disimpan dalam kondisi yang sesuai.
