Foreasy HS Taq DNA Polimerase
Keterangan Kit:
◮Spesifisitas tinggi: Enzim dengan aktivitas hot-start tinggi.
◮Amplifikasi Cepat: 10 dtk/kb.
◮Adaptasi templat tinggi : dapat digunakan untuk memperkuat Tinggi secara efisienGCnilaiDanberbagai templat DNA yang sulit diamplifikasi.
◮Kesetiaan yang kuat: Kesetiaan adalah 6 kaliof Enzim Taq biasa.
Keterangan
Foreasy HS Taq DNA Polymerase adalah enzim Taq baru yang diekspresikan dalam bakteri rekayasa Escherichia coli dengan teknologi rekombinasi gen.Setelah enzim diperlakukan dengan proses khusus, itu'aktivitas s dihambat sebelum aktivasi termal, sehingga menghambat amplifikasi non-spesifik yang disebabkan oleh anil primer atau dimer primer non-spesifik dalam kondisi suhu rendah.Produk ini cocok untuk PCR React yang sangat spesifikion, Beberapa x PCR , konten GC tinggi ( > 60% ),denganstruktur sekunderatau yang lainnyagenom latar belakang yang kuaticsamplifikasi dan genom skala besaricsdeteksi amplifikasi.Enzim tersebut memiliki aktivitas DNA polimerase 5' → 3' dan aktivitas eksonuklease 5' → 3', tetapi tidak ada aktivitas eksonuklease 3' → 5'.
Komponen kit
| Komponen | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2× Penyangga Reaksi Taq | 25 mL ×5 | 250 ml ×5 | 500 mL × 25 |
Fitur & keuntungan
- Spesifisitas tinggi: Enzim dengan aktivitas hot-start tinggi.
- Amplifikasi Cepat: 10 dtk/kb.
- Kemampuan beradaptasi template tinggi: dapat digunakan untuk memperkuat Tinggi secara efisienGCnilaiDanberbagai templat DNA yang sulit diamplifikasi.
- Kesetiaan yang kuat: Kesetiaan adalah 6 kaliof Enzim Taq biasa.
Aplikasi kit
- Berbagai Sistem PCR/qPCR dan sistem PCR langsung
- Fragmen DNA Amplifikasi PCR
- Tanda DNA
- Pengurutan DNA
- PCR plus ekor A
Definisi Aktivitas
1U : Jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menggabungkan 10 nmol dariDNAmenjadi bahan yang tidak larut dalam asam menggunakan DNA sperma salmon aktif sebagai cetakan/primer, 74 °C, 30 menit.
Kondisi Reaksi
| Suhu | Waktu Reaksi | Waktu siklus |
| 37°C | 5 menit | 1 |
| 94°C | 5 menit | 1 |
| 94°C | 10 detik | 40 |
| 60°C | 10 detik |
Catatan:Untuk sistem 10 µL dan 20 µL, tambahkan minyak mineral dengan volume yang sama jika thermal cycler tidak memiliki penutup panas.
Kondisi reaksi PCR bervariasi tergantung pada kondisi struktur template, primer, dan sejenisnya.Dalam operasi khusus, perlu untuk merancang kondisi reaksi yang optimal, termasuk suhu anil, waktu perpanjangan, dll., Sesuai dengan kondisi spesifik seperti jenis templat, ukuran fragmen target, urutan dasar fragmen yang diamplifikasi, dan konten GC serta panjang primer.
Penyimpanan
-20 ± 5 °C selama 2 tahun atau -80 °C untuk penyimpanan jangka panjang.
Tidak ada sinyal amplifikasi
1. Taq DNA Polymerase dalam kit kehilangan aktivitasnya karena penyimpanan yang tidak tepat atau kedaluwarsa kit.
Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan kit;tambahkan kembali Taq DNA Polymerase dalam jumlah yang sesuai ke sistem PCR atau beli Kit PCR Real Time baru untuk eksperimen terkait.
2. Ada banyak penghambat Taq DNA Polymerase dalam cetakan DNA.
Saran: Repurifikasi template atau kurangi jumlah template yang digunakan.
3. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR Mix yang kami sediakan adalah 3,5mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Jumlah template terlalu sedikit atau terlalu banyak.
Rekomendasi: Lakukan pengenceran gradien linearisasi template, dan pilih konsentrasi template dengan efek PCR terbaik untuk percobaan PCR Real Time.
NTC memiliki nilai fluoresensi terlalu tinggi
1.Kontaminasi reagen yang disebabkan selama operasi.
Rekomendasi: Ganti dengan reagen baru untuk eksperimen Real Time PCR.
2.Kontaminasi terjadi selama persiapan sistem reaksi PCR.
Rekomendasi: Lakukan tindakan perlindungan yang diperlukan selama pengoperasian, seperti: mengenakan sarung tangan lateks, menggunakan ujung pipet dengan filter, dll.
3. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan amplifikasi non-spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
Dimer primer atau amplifikasi non-spesifik
1. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR EasyTM Mix yang kami sediakan adalah 3,5 mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
2. Suhu anil PCR terlalu rendah.
Saran: Tingkatkan suhu anil PCR sebesar 1℃ atau 2℃ setiap kali.
3.Produk PCR terlalu panjang.
Rekomendasi: Panjang produk Real Time PCR sebaiknya antara 100-150bp, tidak lebih dari 500bp.
4. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan munculnya amplifikasi spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
Pengulangan nilai kuantitatif yang buruk
1. Instrumen tidak berfungsi.
Saran: Mungkin ada kesalahan di antara setiap lubang PCR instrumen, yang mengakibatkan reproduksibilitas yang buruk selama manajemen atau deteksi suhu.Silakan periksa sesuai dengan instruksi dari instrumen yang sesuai.
2. Kemurnian sampel tidak baik.
Rekomendasi: Sampel yang tidak murni akan menyebabkan reproduktifitas percobaan yang buruk, yang mencakup kemurnian template dan primer.Yang terbaik adalah memurnikan ulang template, dan primer paling baik dimurnikan dengan SDS-PAGE.
3. Waktu persiapan dan penyimpanan sistem PCR terlalu lama.
Saran: Gunakan sistem Real Time PCR untuk percobaan PCR segera setelah persiapan, dan jangan terlalu lama didiamkan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
