Kit Isolasi RNA Total Tanaman Kit Pemurnian RNA Total untuk Tanaman Rendah Polisakarida dan Polifenol
Spesifikasi
50 Persiapan, 200 Persiapan
Kit ini menggunakan spin column dan formula yang dikembangkan oleh Foregene, yang secara efisien dapat mengekstrak RNA total kemurnian tinggi dan kualitas tinggi dari berbagai jaringan tanaman dengan kandungan polisakarida dan polifenol rendah.Untuk sampel tanaman dengan kandungan polisakarida atau polifenol yang tinggi, disarankan menggunakan Plant Total RNA Isolation Plus Kit untuk mendapatkan hasil ekstraksi RNA yang lebih baik.Kit ini menyediakan kolom Pembersihan DNA yang dapat dengan mudah menghilangkan DNA genomik dari supernatan dan lisat jaringan.Kolom khusus RNA dapat secara efektif mengikat RNA.Kit ini dapat memproses sampel dalam jumlah besar secara bersamaan.
Seluruh sistem tidak mengandung RNase, sehingga RNA yang dimurnikan tidak akan terdegradasi.Buffer PRW1 dan Buffer PRW2 dapat memastikan bahwa RNA yang diperoleh tidak terkontaminasi oleh protein, DNA, ion, dan senyawa organik.
Komponen kit
| Penyangga PSL1, Penyangga PS, Penyangga PSL2 |
| Penyangga PRW1, Penyangga PRW2 |
| ddH bebas RNase2O, Kolom Pembersihan DNA |
| Kolom Hanya RNA |
| Instruksi |
Fitur & keuntungan
■ Operasi pada suhu kamar (15-25℃) selama seluruh proses, tanpa penangas es dan sentrifugasi suhu rendah.
■ Kit lengkap Bebas RNase, tidak perlu khawatir tentang degradasi RNA.
■ Kolom Pembersih DNA secara khusus berikatan dengan DNA, sehingga kit dapat menghilangkan kontaminasi DNA genomik tanpa menambahkan DNase.
■ Hasil RNA tinggi: Kolom khusus RNA dan formula unik dapat memurnikan RNA secara efisien.
■ Kecepatan cepat: mudah dioperasikan dan dapat diselesaikan dalam waktu 30 menit.
■ Keamanan: tidak diperlukan reagen organik.
■ Kualitas tinggi: Fragmen RNA yang dimurnikan memiliki kemurnian tinggi, bebas protein dan pengotor lainnya, dan dapat memenuhi berbagai aplikasi eksperimental hilir.
Aplikasi kit
Sangat cocok untuk ekstraksi dan pemurnian RNA total dari sampel jaringan tanaman segar atau beku (terutama jaringan daun tanaman segar) dengan kandungan polisakarida dan polifenol rendah.
Aliran kerja
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus memproses 50mg daun segar polisakarida dan polifenol, dan 5% RNA murni diuji dengan elektroforesis.
1: Pisang
2: Ginkgo
3: Kapas
4: Delima
Penyimpanan dan umur simpan
Kit dapat disimpan selama 12 bulan pada suhu kamar (15–25 ℃) di lingkungan kering, dan 2–8 ℃ untuk waktu yang lebih lama (24 bulan).
Buffer PSL1 dapat disimpan pada 4 ℃ selama 1 bulan setelah menambahkan 2-hidroksi-1-ethanethiol (opsional).
Panduan Analisis Masalah
Berikut analisis masalah yang mungkin Anda temuiTotal TanamanRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Kolom putaran tersumbat
Tersumbatnya spin column akan menyebabkan RNA yield menjadi berkurang atau bahkan tidak dapat dimurnikan untuk mendapatkan RNA, dan kualitas RNA yang diperoleh menjadi rendah.
Analisis Penyebab Umum:
1. Sampel tidak pecah seluruhnya.
Fragmentasi sampel yang tidak lengkap dapat menghalangi Kolom Pembersihan DNA, yang juga dapat memengaruhi hasil dan kualitas RNA.Kami merekomendasikan bahwa saat melakukan fragmentasi sampel, giling dengan cepat nitrogen cair dalam jumlah yang cukup untuk memecah jaringan seperti dinding sel dan membran sel sampel sebanyak mungkin.Untuk sampel tanaman polifenol polisakarida, kami menyarankan Anda menggunakan Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Aspirasi supernatan yang diisolasi dari DNA-Cleaning Column, aspirasi pelet sisa-sisa sel yang mungkin.
Pelet puing sel yang diaspirasi dapat menyumbat Kolom khusus RNA selama prosedur adsorpsi RNA (lihat langkah 5 prosedur, langkah 6 prosedur polifenol polisakarida).Kami merekomendasikan bahwa kehati-hatian harus dilakukan saat mengaspirasi supernatan ini untuk menghindari serpihan sel yang diaspirasi.
3. Jumlah sampel awal terlalu besar.
Penggunaan sampel yang berlebihan akan mengakibatkan fragmentasi sampel yang tidak lengkap atau lisis sel yang tidak lengkap oleh Buffer PRL1 atau Buffer PSL1, sehingga kolom pemurnian tersumbat untuk operasi pemurnian.Kit Isolasi RNA Total Tumbuhan memiliki maksimum awal 50 mg per satu pemurnian sampel yang dioperasikan.Untuk sampel tanaman polifenol polisakarida, kami sarankan Anda mencoba Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Suhu centrifuge terlalu rendah.
Isolasi dan pemurnian RNA utuh kecuali untuk gangguan nitrogen cair pada jaringan sampel, semua langkah dilakukan pada suhu kamar (20-25 °C).Beberapa sentrifugal suhu rendah memiliki suhu di bawah 20 °C, yang dapat menyebabkan penyumbatan pada Kolom Pembersih DNA dan/atau Kolom khusus RNA.Jika hal ini terjadi, setel suhu sentrifus ke 20-25 °C dan panaskan terlebih dahulu campuran lisis dan/atau penambahan supernatan pemisahan etanol ke suhu 37 °C.
Tidak ada RNA yang diekstraksi atau hasil RNA rendah
Biasanya ada banyak faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel, metode operasi, volume elusi, dll.
Analisis penyebab umum seperti di bawah ini:
1. Mandi es atau sentrifugasi suhu rendah (4 ° C) dilakukan selama operasi.
Saran: Operasikan pada suhu kamar (15-25°C) di seluruh proses, jangan lakukan penangas es dan sentrifugasi suhu rendah.
2.RNA telah terdegradasi karena pengawetan sampel yang tidak tepat atau pengawetan sampel dalam jangka panjang.
Rekomendasi: Sampel yang baru dikumpulkan harus dibekukan dengan cepat dalam nitrogen cair, dan kemudian disimpan pada suhu -80°C untuk waktu yang lama, hindari pembekuan dan pencairan berulang pada sampel;atau segera rendam sampel dalam larutan RNA stabilizer RNAlater (sampel hewan).
3.Fragmentasi dan lisis sampel yang tidak mencukupi menyebabkan penyumbatan kolom pemurnian.
Saran: Saat menggiling jaringan, harap pastikan bahwa jaringan cukup digiling, dan segera pindahkan ke Buffer PSL1 yang telah disiapkan sebelumnya (pastikan bahwa proporsi β-ME yang benar telah ditambahkan, lihat langkah 1 prosedur).
4.Eluen ditambahkan secara tidak benar.
Saran: Pastikan ddH Bebas RNase2O diteteskan ke tengah membran kolom pemurnian.
5. Volume etanol absolut yang benar tidak ditambahkan ke Buffer PSL2 atau Buffer PRW2.
Saran: Silakan ikuti petunjuknya, tambahkan volume etanol absolut yang benar ke Buffer PSL2 dan Buffer PRW2 dan aduk rata sebelum kit digunakan.
6.Jumlah sampel jaringan tidak sesuai.
Saran: Gunakan 50 mg tisu per 500 μl Buffer PSL1.Menggunakan terlalu banyak jaringan akan mengurangi jumlah RNA yang diekstraksi dan kemurnian RNA yang dihasilkan juga akan berkurang.Kami sangat menganjurkan bahwa dosis sampel awal tidak boleh melebihi 50 mg per operasi ekstraksi RNA.
7. Volume elusi yang tidak sesuai atau elusi yang tidak lengkap.
Saran: Volume eluen kolom pemurnian adalah 50-200 μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk memperpanjang waktu pada suhu kamar setelah menambahkan ddH Bebas RNase yang dipanaskan sebelumnya2O, seperti 5-10 menit.
8. Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah dicuci dengan Buffer PRW2.
Saran: Jika tabung kosong disentrifugasi selama 1 menit dan masih ada etanol yang tersisa setelah dicuci dalam Buffer PRW2, Anda dapat menambah waktu sentrifugasi tabung kosong menjadi 2 menit, atau tempatkan kolom pemurnian pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan sisa etanol sepenuhnya.
9. Kit tidak digunakan dengan benar.
Saran: Untuk sampel tanaman polifenol polisakarida, menggunakan kit umum seperti Kit Isolasi RNA Total Tanaman mungkin tidak dapat memperoleh sampel RNA yang ideal.Kami menyarankan Anda untuk menggunakan Plant Total RNA IsolationKit Plus, yang dirancang khusus untuk sampel tanaman polifenol polisakarida.Kit yang dikembangkan khusus untuk mengekstraksi RNA dari sampel tanaman polifenol dan polisakarida.
Nilai OD260/OD280 rendah
Elusi RNA dengan ddH2O dan digunakan untuk pembacaan spektrofotometer menghasilkan nilai OD260/OD280 yang rendah.Kami merekomendasikan penggunaan 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (daripada ddH RNase-Free ddH2O untuk mengelusi RNA) untuk mendapatkan nilai OD260/OD280 yang relatif tepat, lihat “Pengujian Konsentrasi dan Pemurnian RNA” di halaman 19.
RNA murni terdegradasi
Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti pengawetan sampel, kontaminasi RNase, dan manipulasi.
Analisis penyebab umum:
1. Sampel jaringan tidak disimpan tepat waktu setelah pengumpulan.
Rekomendasi: Jika sampel jaringan tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, segera simpan dalam nitrogen cair pada suhu rendah atau pindahkan ke suhu -80°C untuk penyimpanan jangka panjang setelah pembekuan cepat dalam nitrogen cair, atau segera rendam sampel dalam larutan RNA stabilizer RNAlater (sampel hewan).Untuk ekstraksi RNA, coba gunakan sampel jaringan yang baru dikumpulkan.
2. Pembekuan berulang dan pencairan sampel jaringan.
Saran: Saat menyimpan sampel jaringan, yang terbaik adalah memotongnya menjadi potongan-potongan kecil untuk pengawetan, dan mengambil sebagian darinya saat digunakan untuk menghindari degradasi RNA yang disebabkan oleh pembekuan berulang dan pencairan sampel.
3.RNase diperkenalkan di ruang operasi atau tidak memakai sarung tangan sekali pakai, masker, dll.
Saran: Eksperimen ekstraksi RNA paling baik dilakukan dalam operasi RNA terpisah, dan meja laboratorium harus dibersihkan sebelum percobaan, dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai selama percobaan untuk menghindari degradasi RNA yang disebabkan oleh pengenalan RNase secara maksimal.
4. Reagen terkontaminasi oleh RNase saat digunakan.
Saran: Ganti dengan kit ekstraksi RNA total tanaman seri baru untuk eksperimen terkait.
5. Tabung sentrifus dan ujung pipet yang digunakan untuk manipulasi RNA terkontaminasi dengan RNase.
Saran: Pastikan tabung sentrifus, ujung pipet, pipet, dll. yang digunakan dalam ekstraksi RNA semuanya Bebas RNase.
Instruksi Manual:
