• facebook
  • linkedin
  • Youtube
spanduk

Penjelasan istilah biologi molekuler dasar

Paket Biologi Molekuler

1. cDNA dan cccDNA: cDNA adalah DNA beruntai ganda yang disintesis oleh transkriptase balik dari mRNA;cccDNA adalah DNA sirkular tertutup beruntai ganda plasmid yang bebas dari kromosom.
2. Unit lipat standar: unit struktur sekunder protein α-helix dan β-sheet dapat membentuk blok struktural dengan pengaturan geometris khusus melalui berbagai polipeptida penghubung.Jenis lipatan yang ditentukan ini biasanya disebut struktur super sekunder.Hampir semua struktur tersier dapat dijelaskan oleh tipe lipat ini, dan bahkan tipe gabungannya, sehingga disebut juga unit lipat standar.
3. CAP: protein reseptor siklik adenosin monofosfat (cAMP) CRP (protein reseptor cAMP), kompleks yang terbentuk setelah kombinasi cAMP dan CRP disebut protein pengaktif CAP (protein aktif cAMP)
4. Urutan palindromik: Urutan komplementer terbalik dari segmen fragmen DNA, seringkali merupakan situs enzim restriksi.
5. micRNA: Complementary interfering RNA atau antisense RNA, yang melengkapi urutan mRNA dan dapat menghambat translasi mRNA.
6. Ribozim: RNA dengan aktivitas katalitik, yang berperan sebagai autokatalitik dalam proses penyambungan RNA.
7. Motif: Ada beberapa daerah lokal dengan bentuk dan topologi tiga dimensi yang mirip dalam struktur spasial molekul protein
8. Peptida sinyal: peptida dengan 15-36 residu asam amino di N-terminus selama sintesis protein, yang memandu transmembran protein.
9. Attenuator: Urutan nukleotida antara wilayah operator dan gen struktural yang mengakhiri transkripsi.
10. Bintik Ajaib: Ketika bakteri tumbuh dan mengalami kekurangan asam amino, bakteri akan menghasilkan respons darurat untuk menghentikan ekspresi semua gen.Sinyal yang menghasilkan tanggap darurat ini adalah guanosin tetrafosfat (ppGpp) dan guanosin pentafosfat (pppGpp).Peran PpGpp dan pppGpp tidak hanya satu atau beberapa operon, tetapi memengaruhi banyak di antaranya, sehingga disebut super-regulator atau magic spot.
11. Elemen promotor hulu: mengacu pada sekuen DNA yang berperan mengatur aktivitas promotor, seperti TATA di wilayah -10, TGACA di wilayah -35, enhancer, dan attenuator.
12. Probe DNA: segmen DNA berlabel dengan urutan yang diketahui, yang banyak digunakan untuk mendeteksi urutan yang tidak diketahui dan menyaring gen target.
13. Urutan SD: Ini adalah urutan pengikatan ribosom dan mRNA, yang mengatur terjemahan.
14. Antibodi Monoklonal: Antibodi yang hanya bekerja melawan determinan antigenik tunggal.
15. Kosmid: Ini adalah vektor DNA eksogen buatan yang mempertahankan wilayah COS di kedua ujung fag dan terhubung ke plasmid.
16. Blue-white spot screening : Gen LacZ (encoding β-galactosidase), enzim dapat menguraikan substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) untuk menghasilkan warna biru, sehingga membuat strain menjadi biru.Ketika DNA eksogen dimasukkan, gen LacZ tidak dapat diekspresikan, dan strainnya berwarna putih, untuk menyaring bakteri rekombinan.Ini disebut skrining biru-putih.
17. Cis-acting element: Urutan spesifik basa dalam DNA yang mengatur ekspresi gen.
18. Enzim Klenow: Fragmen besar DNA polimerase I, kecuali bahwa aktivitas eksonuklease 5' 3' dihilangkan dari holoenzim DNA polimerase I
19. PCR berlabuh: digunakan untuk memperkuat DNA yang diinginkan dengan urutan yang diketahui di salah satu ujungnya.Ekor poli-dG ditambahkan ke salah satu ujung urutan yang tidak diketahui, dan kemudian poli-dC dan urutan yang diketahui digunakan sebagai primer untuk amplifikasi PCR.
20. Protein fusi: Gen protein eukariotik terhubung dengan gen eksogen, dan protein yang terdiri dari terjemahan protein gen asli dan protein eksogen diekspresikan pada saat yang bersamaan.

Istilah biologi molekuler lainnya

1. Peta fisik DNA adalah urutan di mana fragmen molekul DNA (restriksi endonuclease-digested) disusun.
2. Pembelahan RNase terbagi menjadi dua jenis (autocatalysis) dan (heterocatalysis).
3. Ada tiga faktor inisiasi pada prokariota yaitu (IF-1), (IF-2) dan (IF-3).
4. Protein transmembran memerlukan panduan (peptida sinyal), dan peran pendamping protein adalah (membantu melipat rantai peptida menjadi konformasi asli protein).
5. Elemen promotor secara umum dapat dibagi menjadi dua jenis: (elemen promotor inti) dan (elemen promotor hulu).
6. Isi penelitian biologi molekuler terutama mencakup tiga bagian: (biologi molekuler struktural), (ekspresi dan regulasi gen), dan (teknologi rekombinasi DNA).
7. Dua percobaan utama yang menunjukkan bahwa DNA adalah materi genetik adalah (infeksi pneumokokus tikus) dan (infeksi fag T2 Escherichia coli).potensi).
8. Ada dua perbedaan utama antara hnRNA dan mRNA: (hnRNA disambung dalam proses konversi menjadi mRNA), (ujung 5' mRNA ditambahkan dengan tutup m7pGppp, dan ada poliadenilasi ekstra pada ujung 3' dari ekor asam mRNA (polyA)).
9. Keuntungan bentuk multi-subunit dari protein adalah (subunit merupakan metode yang ekonomis untuk pemanfaatan DNA), (dapat mengurangi dampak kesalahan acak dalam sintesis protein pada aktivitas protein), (aktivitas dapat dibuka dan ditutup dengan sangat efisien dan cepat).
10. Kandungan utama mekanisme pelipatan protein Teori nukleasi pertama meliputi (nukleasi), (pengayaan struktural), (penyusunan ulang akhir).
11. Galaktosa memiliki efek ganda pada bakteri;di satu sisi (dapat digunakan sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan sel);di sisi lain (itu juga merupakan komponen dinding sel).Oleh karena itu, promotor S2 cAMP-CRP-independen diperlukan untuk sintesis permanen di tingkat latar belakang;pada saat yang sama, promotor S1 yang bergantung pada cAMP-CRP diperlukan untuk mengatur sintesis tingkat tinggi.Transkripsi dimulai dari ( S2 ) dengan G dan dari ( S1 ) tanpa G.
12. Teknologi DNA rekombinan disebut juga (kloning gen) atau (kloning molekuler).Tujuan utamanya adalah (untuk mentransfer DNA informasi genetik dalam satu organisme ke organisme lain).Eksperimen rekombinasi DNA tipikal biasanya mencakup langkah-langkah berikut: (1) Ekstrak gen target (atau gen eksogen) dari organisme donor, dan secara enzimatis menghubungkannya ke molekul DNA lain (vektor kloning) untuk membentuk molekul DNA rekombinan baru.② Molekul DNA rekombinan dipindahkan ke sel penerima dan direplikasi di sel penerima.Proses ini disebut transformasi.③ Menyaring dan mengidentifikasi sel penerima yang telah menyerap DNA rekombinan.④Kultivasi sel yang mengandung DNA rekombinan dalam jumlah besar untuk mendeteksi apakah gen bantuan asing diekspresikan.
13. Ada dua jenis replikasi plasmid: yang dikontrol ketat oleh sintesis protein sel inang disebut (plasmid ketat), dan yang tidak dikontrol ketat oleh sintesis protein sel inang disebut (plasmid santai).
14. Sistem reaksi PCR harus memiliki ketentuan sebagai berikut: a.Primer DNA (sekitar 20 basa) dengan sekuens komplementer di setiap ujung dua untai gen target akan dipisahkan.B.Enzim dengan stabilitas termal seperti: TagDNA polimerase.c, dNTPd, urutan DNA yang menarik sebagai templat
15. Proses reaksi dasar PCR meliputi tiga tahap: (denaturasi), (anil), dan (ekstensi).
16. Proses dasar hewan transgenik biasanya meliputi: ①Pengenalan gen asing hasil kloning ke dalam inti telur yang telah dibuahi atau sel punca embrionik;②Transplantasi telur yang telah dibuahi atau sel punca embrio ke dalam rahim wanita;③Menyelesaikan perkembangan dan pertumbuhan embrio Untuk keturunan dengan gen asing;④ Gunakan hewan-hewan ini yang dapat menghasilkan protein asing sebagai bibit untuk membiakkan galur homozigot baru.
17. Garis sel hibridoma dihasilkan dengan menghibridisasi sel (limpa B) dengan sel (mieloma), dan karena (sel limpa) dapat menggunakan hipoksantin dan (sel tulang) memberikan fungsi pembelahan sel, garis tersebut dapat ditumbuhkan dalam media HAT.tumbuh.
18. Dengan pendalaman penelitian, antibodi generasi pertama disebut (antibodi poliklonal), generasi kedua (antibodi monoklonal), dan generasi ketiga (antibodi rekayasa genetika).
19. Saat ini, rekayasa genetika virus serangga terutama difokuskan pada baculovirus, yang dimanifestasikan dalam introduksi (gen toksin eksogen);(gen yang mengganggu siklus hidup normal serangga);(modifikasi gen virus).
20. Faktor protein trans-acting yang sesuai dengan elemen umum TATA, GC, dan CAAT dalam promotor RNA polimerase II mamalia adalah (TFIID), (SP-1) dan (CTF/NF1), masing-masing.
dua puluh satu.Faktor transkripsi dasar RNA polimerase Ⅱ adalah, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, dan urutan pengikatannya adalah: (D, A, B, E).Dimana fungsi TFII-D adalah (mengikat kotak TATA).
dua puluh dua.Sebagian besar faktor transkripsi yang berikatan dengan DNA bekerja dalam bentuk dimer.Domain fungsional dari faktor transkripsi yang berikatan dengan DNA umumnya adalah sebagai berikut (helix-turn-helix), (motif jari seng), (motif ritsleting dasar-leusin).
dua puluh tiga.Ada tiga jenis mode pembelahan endonuklease restriksi: (potong pada sisi 5' sumbu simetri untuk menghasilkan ujung lengket 5'), (potong pada sisi 3' sumbu simetri untuk menghasilkan ujung lengket 3' (potong pada sumbu simetri untuk menghasilkan segmen datar) ).
dua puluh empat.DNA plasmid memiliki tiga konfigurasi yang berbeda: (konfigurasi SC), (konfigurasi oc), (konfigurasi L).Yang pertama dalam elektroforesis adalah (konfigurasi SC).
25. Sistem ekspresi gen eksogen, terutama (Escherichia coli), (Ragi), (Serangga) dan (tabel sel mamalia).
26. Metode yang umum digunakan untuk hewan transgenik adalah: (metode infeksi retroviral), (metode mikroinjeksi DNA), (metode sel punca embrionik).

Aplikasi Biologi molekuler

1. Sebutkan fungsi lebih dari 5 RNA?
Transfer RNA tRNA Transfer asam amino Ribosome RNA rRNA Ribosom membentuk messenger RNA mRNA Template sintesis protein RNA nuklir heterogen hnRNA Prekursor mRNA dewasa RNA nuklir kecil snRNA Terlibat dalam penyambungan hnRNA RNA sitoplasma kecil protein scRNA/7SL-RNA Retikulum plasma terlokalisasi dan komponen tubuh pengenalan sinyal yang disintesis Antisense RNA anRNA/micRNA Mengatur ekspresi gen Ribozyme RNA RNA aktif secara enzimatis
2. Apa perbedaan utama antara promotor prokariotik dan eukariotik?
Prokariotik TTGACA --- TATAAT------Situs Inisiasi-35 -10 Penambah Eukariotik---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Situs Inisiasi-110 -70 -25
3. Apa aspek utama konstruksi buatan dari plasmid alami?
Plasmid alam seringkali memiliki cacat, sehingga tidak cocok digunakan sebagai pembawa untuk rekayasa genetika, dan harus dimodifikasi dan dikonstruksi: a.Tambahkan gen penanda seleksi yang sesuai, seperti dua atau lebih, yang mudah digunakan untuk seleksi, biasanya gen antibiotik.B.Menambah atau mengurangi situs pemotongan enzim yang sesuai untuk memfasilitasi rekombinasi.C.Persingkat panjangnya, potong fragmen yang tidak perlu, tingkatkan efisiensi impor, dan tingkatkan kapasitas pemuatan.D.Ubah replikanya, dari ketat menjadi longgar, dari lebih sedikit salinan menjadi lebih banyak salinan.e.Tambahkan elemen genetik khusus sesuai dengan persyaratan khusus rekayasa genetika
4. Berikan contoh metode skrining diferensial cDNA spesifik jaringan?
Dua populasi sel disiapkan, gen target diekspresikan atau diekspresikan tinggi di salah satu sel, dan gen target tidak diekspresikan atau diekspresikan rendah di sel lain, dan kemudian gen target ditemukan melalui hibridisasi dan perbandingan.Misalnya, selama terjadinya dan berkembangnya tumor, sel tumor akan menampilkan mRNA dengan tingkat ekspresi yang berbeda dari sel normal.Oleh karena itu, gen terkait tumor dapat disaring dengan hibridisasi diferensial.Metode induksi juga dapat digunakan untuk menyaring gen yang ekspresinya diinduksi.
5. Generasi dan skrining garis sel hibridoma?
Sel B limpa + sel myeloma, tambahkan polietilen glikol (PEG) untuk mempromosikan fusi sel, dan sel fusi B-myeloma lien yang tumbuh dalam media HAT (mengandung hipoksantin, aminopterin, T) terus berkembang memberi nutrisi.Fusi sel mengandung: sel fusi limpa-limpa: tidak dapat tumbuh, sel limpa tidak dapat dikultur secara in vitro.Sel fusi tulang-tulang: tidak dapat memanfaatkan hipoksantin, tetapi dapat mensintesis purin melalui jalur kedua menggunakan reduktase folat.Aminopterin menghambat reduktase folat dan karenanya tidak dapat tumbuh.Sel fusi tulang-limpa: dapat tumbuh di HAT, sel limpa dapat memanfaatkan hipoksantin, dan sel tulang memberikan fungsi pembelahan sel.
6. Apa prinsip dan metode penentuan struktur primer DNA dengan metode terminasi terminal dideoksi (metode Sanger)?
Prinsipnya adalah menggunakan terminator rantai nukleotida—2,,3,-dideoxynucleotide untuk mengakhiri perpanjangan DNA.Karena tidak memiliki 3-OH yang diperlukan untuk pembentukan ikatan 3/5/fosfodiester, setelah dimasukkan ke dalam rantai DNA, rantai DNA tidak dapat diperpanjang lebih jauh.Menurut prinsip pemasangan basa, setiap kali DNA polimerase membutuhkan dNMP untuk berpartisipasi dalam rantai DNA yang diperpanjang secara normal, ada dua kemungkinan, satu adalah berpartisipasi dalam ddNTP, yang mengakibatkan penghentian perpanjangan rantai deoksinukleotida;yang lainnya adalah berpartisipasi dalam dNTP , sehingga rantai DNA masih dapat terus berlanjut hingga ddNTP berikutnya digabungkan.Menurut metode ini, sekelompok fragmen DNA dengan panjang berbeda yang diakhiri dengan ddNTP dapat diperoleh.Metode tersebut dibagi menjadi empat kelompok masing-masing ddAMP, ddGMP, ddCMP, dan ddTMP.Setelah reaksi, elektroforesis gel poliakrilamida dapat membaca urutan DNA sesuai dengan pita renang.
7. Apa efek regulasi positif protein aktivator (CAP) pada transkripsi?
Cyclic adenylate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), kompleks yang dibentuk oleh kombinasi cAMP dan CRP disebut CAP (cAMPactivated protein).Ketika E. coli ditumbuhkan dalam media yang kekurangan glukosa, sintesis CAP meningkat, dan CAP berfungsi mengaktifkan promotor seperti laktosa (Lac).Beberapa promotor yang bergantung pada CRP tidak memiliki fitur urutan wilayah -35 tipikal (TTGACA) yang dimiliki oleh promotor umum.Oleh karena itu, sulit bagi RNA polimerase untuk mengikatnya.Kehadiran CAP (fungsi): secara signifikan dapat meningkatkan konstanta pengikatan enzim dan promotor.Ini terutama menunjukkan dua aspek berikut: ① CAP membantu molekul enzim untuk mengarahkan dengan benar dengan mengubah konformasi promotor dan interaksi dengan enzim, sehingga dapat bergabung dengan wilayah -10 dan memainkan peran menggantikan fungsi wilayah -35.②CAP juga dapat menghambat pengikatan RNA polimerase ke situs lain dalam DNA, sehingga meningkatkan kemungkinan pengikatan ke promotor spesifiknya.
8. Langkah-langkah apa yang biasanya disertakan dalam percobaan rekombinasi DNA?
A.Ekstrak gen target (atau gen eksogen) dari organisme donor, dan hubungkan secara enzimatik ke molekul DNA lain (vektor kloning) untuk membentuk molekul DNA rekombinan baru.B.Transfer molekul DNA rekombinan ke dalam sel penerima dan replikasi serta simpan di dalam sel penerima.Proses ini disebut transformasi.C.Saring dan identifikasi sel penerima yang telah menyerap DNA rekombinan.D.Kultur massal sel-sel yang mengandung DNA rekombinan untuk mendeteksi apakah gen bantuan asing diekspresikan.
9. Konstruksi perpustakaan gen Tiga metode untuk penyaringan rekombinan diberikan dan prosesnya dijelaskan secara singkat.
Skrining resistensi antibiotik, inaktivasi insersional resistensi, skrining bercak biru-putih atau skrining PCR, skrining diferensial, probe DNA Kebanyakan vektor kloning membawa gen resistensi antibiotik (anti-ampisilin, tetrasiklin).Ketika plasmid dipindahkan ke Escherichia coli, bakteri akan memperoleh resistensi, dan yang tanpa transfer tidak akan memiliki resistensi.Tapi tidak bisa membedakan apakah sudah ditata ulang atau belum.Dalam vektor yang mengandung dua gen resistensi, jika fragmen DNA asing dimasukkan ke dalam salah satu gen dan menyebabkan gen menjadi tidak aktif, dua pelat kontrol yang mengandung obat berbeda dapat digunakan untuk menyaring rekombinan positif.Misalnya, plasmid pUC mengandung gen LacZ (encoding β-galactosidase), yang dapat menguraikan substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) untuk menghasilkan warna biru , sehingga mengubah galur menjadi biru.Ketika DNA asing dimasukkan, gen LacZ tidak dapat diekspresikan, dan strainnya berwarna putih, untuk menyaring bakteri rekombinan.
10. Jelaskan proses dasar memperoleh hewan transgenik melalui sel punca embrionik?
Sel induk embrionik (ES) adalah sel embrionik selama perkembangan embrionik, yang dapat dikultur dan diproliferasi secara artifisial dan memiliki fungsi berdiferensiasi menjadi jenis sel lain.Kultur sel ES: Massa sel bagian dalam blastokista diisolasi dan dikultur.Ketika ES dibiakkan pada lapisan feeder-free, ia akan berdiferensiasi menjadi berbagai sel fungsional seperti sel otot dan sel N.Ketika dibiakkan dalam media yang mengandung fibroblas, ES akan mempertahankan fungsi diferensiasinya.ES dapat dimanipulasi secara genetik, dan fungsi diferensiasinya dapat diintegrasikan tanpa mempengaruhi fungsi diferensiasinya, yang memecahkan masalah integrasi acak.Introduksi gen eksogen ke dalam sel punca embrionik, kemudian ditanamkan ke dalam rahim tikus betina hamil, berkembang menjadi anak anjing, dan disilangkan untuk mendapatkan tikus homozigot.