Kit Isolasi RNA Total Hewan Kit Ekstraksi dan Pemurnian RNA Total untuk Jaringan & Sel Hewan
Keterangan Kit:
Dengan cepat dan efisien mengekstrak RNA total dengan kemurnian tinggi dan berkualitas tinggi dari berbagai jaringan hewan.
Tidak perlu khawatir tentang degradasi RNA.Seluruh sistem bebas RNase
Menghapus DNA secara efektif menggunakan Kolom Pembersih DNA
Hapus DNA tanpa menambahkan DNase
Sederhana—semua operasi diselesaikan pada suhu kamar
Cepat—operasi dapat diselesaikan dalam 30 menit
Aman—tidak ada reagen organik yang digunakan
Kemurnian tinggi—OD260/280≈1.8-2.1
Deskripsi Kit
50 Persiapan, 200 Persiapan
Kit ini menggunakankolom spin dan rumusdikembangkan oleh perusahaan kami, yang dapat mengekstrak RNA total kemurnian tinggi dan berkualitas tinggi dari berbagai jaringan hewan dengan efisiensi tinggi. Ini menyediakan Kolom Pembersihan DNA yang efisien, yang dapat dengan mudah memisahkan dan menyerap DNA genom dari supernatan dan lisat jaringan, sederhana dan hemat waktu;Kolom khusus RNA dapat mengikat RNA secara efisien dan dapat diproses secara bersamaan dengan formula unik Banyak sampel.
Seluruh sistem bebas RNase, sehingga RNA yang diekstraksi tidak terdegradasi;Buffer RW1, Buffer RW2 sistem pencucian buffer, sehingga RNA yang diperoleh bebas dari pencemaran protein, DNA, ion, dan senyawa organik.
Komponen kit
| Kit Isolasi RNA Total Hewan | ||
| Komponen kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Penyangga RL1* | 25ml | 100ml |
| Penyangga RL2 | 15ml | 60ml |
| Penyangga RW1* | 25ml | 100ml |
| Penyangga RW2 | 24ml | 96ml |
| ddH2O Bebas RNase | 10ml | 40ml |
| Kolom khusus RNA | 50 | 200 |
| Kolom Pembersihan DNA | 50 | 200 |
| Instruksi manual | 1 buah | 1 buah |
Informasi produk
| Format | Kolom putar | Komponen pemurnian | Kolom foregena, reagen |
| Aliran | 1-24 sampel | Waktu per persiapan | ~30 mnt (24 sampel) |
| Sentrifugal | Mesin sentrifugal meja | pemisahan pirolisis | Pemisahan sentrifugal |
| Sampel | Jaringan hewan;sel | Jumlah sampel | Jaringan: 10-20 mg;Sel:(1-5)×106 |
| Volume elusi | 50-200μL | Volume pemuatan maksimum | 850μL |
Fitur & keuntungan
■ Tidak perlu khawatir tentang degradasi RNA;seluruh sistem bebas RNase
■ Secara efektif menghapus Kolom Pembersihan DNA menggunakan DNA
■ Hapus DNA tanpa menambahkan DNase
■ Sederhana-semua operasi selesai pada suhu kamar
■ Operasi cepat dapat diselesaikan dalam 30 menit
■ Aman-tidak perlu reagen organik
■ Kemurnian tinggi -OD260/280≈1.8-2.1
Aplikasi kit
Sangat cocok untuk ekstraksi dan pemurnian RNA total dari berbagai jaringan hewan segar atau beku atau sel kultur.
Parameter produk
■ Aplikasi hilir: sintesis cDNA untai pertama, RT-PCR, kloning molekuler, Northern Blot, dll.
■ Sampel: jaringan hewan, sel biakan
■ Dosis: Jaringan 10-20mg, Sel(2-5)×106
■ Kapasitas pengikatan DNA maksimum kolom pemurnian: 80 μg
■ Volume elusi: 50-200 μl
Diagram
Kit Isolasi RNA Total Hewan diperlakukan 20mg
Sampel tikus segar, ambil 5% agar total RNA 1% murni
elektroforesis glikogel
1: Limpa 2: Ginjal
3: Hati 4: Hati
Penyimpanan dan umur simpan
Kit dapat disimpan selama 24 bulan pada suhu kamar (15–25 ℃) atau 2–8 ℃ untuk waktu yang lebih lama.Buffer RL1 dapat disimpan pada suhu 4 ℃ selama 1 bulan setelah menambahkan β-mercaptoethanol (opsional).
Artikel yang dikutip
1.JIKA:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., dkk.mRNA-Loaded Lipid-Like Nanoparticles untuk Pengeditan Basis Hati Melalui Optimalisasi Desain Komposit Pusat.LanjutFungsi.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.JIKA:18.187:He X, Hong W, Yang J, dkk.Apoptosis spontan sel dalam persiapan sel induk terapeutik memberikan efek imunomodulator melalui pelepasan fosfatidilserin.Target Transduksi Sinyal Ada.14 Juli 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.JIKA: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, dkk.Modifikasi tRNA N7-Methylguanosine meningkatkan translasi mRNA onkogenik dan mendorong perkembangan kolangiokarsinoma intrahepatik.Sel Mol.2021 Juli 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.JIKA:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, dkk.Modifikasi m6A yang Dimediasi Mettl14 Memfasilitasi Regenerasi Hati dengan Mempertahankan Homeostasis Retikulum Endoplasma.Sel Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kit isolasi RNA untuk sumber sampel lainnyatersedia:
Sel, tanaman, virus, darah, dll.
RNA tidak diekstraksi atau hasil RNA rendah
Seringkali terdapat berbagai faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel jaringan, metode operasi, volume elusi, dll.
1. Pemandian es atau sentrifugasi kriogenik (4 °C) dilakukan selama pengoperasian.
Rekomendasi: Operasikan pada suhu kamar (15-25 ° C) selama seluruh proses, jangan penangas es dan centrifuge pada suhu rendah.
2. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau waktu penyimpanan sampel yang berlebihan.
Rekomendasi: Simpan sampel pada suhu -80 °C atau bekukan dalam nitrogen cair dan hindari penggunaan beku-cair berulang kali;coba gunakan jaringan segar atau sel biakan untuk ekstraksi RNA.
3. Lisis sampel tidak mencukupi.
Rekomendasi: Saat menghomogenkan jaringan, pastikan bahwa jaringan cukup homogen dan sel-sel jaringan cukup terpisah untuk menjelaskan pelepasan RNA.
4. Eluen tidak ditambahkan dengan benar.
Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa ddH Bebas RNase2O ditambahkan tetes demi tetes ke tengah membran kolom pemurnian.
5. Volume etanol absolut yang benar tidak ditambahkan ke Buffer RL2 atau Buffer RW2.
Rekomendasi: Ikuti instruksi, tambahkan etanol absolut dengan volume yang benar ke Buffer RL2 dan Buffer RW2 dan aduk rata sebelum menggunakan kit.
6. Dosis sampel jaringan tidak sesuai.
Anjuran : Gunakan 10-20 mg tissue atau (1-5)×106sel per 500 μl buffer RL1, karena penggunaan jaringan yang berlebihan dapat mengakibatkan berkurangnya ekstraksi RNA.
7. Volume elusi tidak tepat atau elusi tidak lengkap.
Rekomendasi: Volume elusi kolom pemurnian adalah 50-200 μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk memperpanjang waktu penempatan suhu kamar setelah menambahkan ddH Bebas RNase-Free yang dipanaskan sebelumnya2O, misalnya selama 5-10 menit.
8. Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah pencucian Buffer RW2.
Rekomendasi: Jika terdapat residu etanol setelah pencucian Buffer RW2, sentrifugasi tabung kosong selama 1 menit, waktu operasi sentrifugasi tabung kosong dapat ditingkatkan menjadi 2 menit, atau kolom pemurnian dapat ditempatkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan sisa etanol secara memadai.
RNA murni terdegradasi
Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti pengawetan sampel, kontaminasi RNase, dan manipulasi, dll.
1. Sampel jaringan tidak disimpan tepat waktu.
Rekomendasi: Jika sampel jaringan atau sel tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, segera lakukan kriopreservasi pada suhu -80 °C atau nitrogen cair.Untuk mengekstraksi RNA, gunakan sampel jaringan atau sel yang baru diambil jika memungkinkan.
2. Sampel jaringan yang dibekukan berulang kali.
Rekomendasi: Saat menyimpan sampel jaringan, yang terbaik adalah memotongnya menjadi potongan-potongan kecil untuk pengawetan, dan membuang salah satu potongan saat menggunakannya untuk menghindari pembekuan berulang pada sampel dan degradasi RNA.
3. RNase diperkenalkan atau tidak memakai sarung tangan sekali pakai, masker, dll selama operasi.
Rekomendasi: Eksperimen ekstraksi RNA paling baik dilakukan di ruang manipulasi RNA terpisah dan meja dibersihkan sebelum eksperimen.
Kenakan sarung tangan dan masker sekali pakai selama percobaan untuk meminimalkan degradasi RNA yang disebabkan oleh masuknya RNase.
4. Reagen terkontaminasi RNase selama penggunaan.
Rekomendasi: Ganti dengan Kit Isolasi RNA Total Hewan baru untuk eksperimen terkait.
5. Tabung centrifuge, tip, dll. yang digunakan dalam manipulasi RNA terkontaminasi dengan RNase.
Rekomendasi: Pastikan tabung sentrifus, tip, pipet, dll. yang digunakan dalam ekstraksi RNA semuanya Bebas RNase.
RNA yang diperoleh yang dimurnikan memengaruhi eksperimen hilir
RNA dimurnikan oleh kolom pemurnian, jika ion garam, kandungan protein terlalu besar akan mempengaruhi percobaan hilir, seperti: transkripsi terbalik,Northern Blot et al.
1. RNA yang dielusi memiliki residu ion garam.
Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa volume etanol yang benar telah ditambahkan ke Buffer RW2 dan lakukan 2 pencucian kolom pemurnian pada kecepatan sentrifugal yang ditunjukkan untuk pengoperasian;jika ada residu ion garam, tinggalkan kolom pemurnian ke Buffer RW2 selama 5 menit pada suhu kamar dan lakukan sentrifugasi untuk memaksimalkan penghilangan kontaminasi garam.
2. Residu etanol dalam RNA yang dielusi.
Rekomendasi: Pastikan setelah pencucian buffer RW2, lakukan operasi sentrifugasi tabung kosong pada kecepatan sentrifugasi yang ditunjukkan untuk operasi, tingkatkan waktu operasi sentrifugasi tabung kosong menjadi 2 menit jika masih ada residu etanol, atau biarkan pada suhu kamar selama 5 menit setelah sentrifugasi tabung kosong untuk memaksimalkan penghilangan residu etanol.
