Taq DNA Polimerase Foreasy
Keterangan Kit:
◮Spesifisitas tinggi: Enzim memiliki aktivitas hot-start tertentu.
◮Amplifikasi Cepat: 10 dtk/kb.
◮Template yang sangat mudah beradaptasi: dapat digunakan untuk memperkuat GC bernilai tinggi secara efisien, berbagai template DNA yang sulit diamplifikasi.
◮Kesetiaan yang kuat: Enzim Taq biasa 6 kali.
◮Stabilitas termal yang kuat: Dapat ditempatkan pada suhu 37 °C selama seminggu dan mempertahankan aktivitas lebih dari 90%.
Keterangan
Foreasy Taq DNA Polymerase adalah enzim Taq baru yang diekspresikan dalam bakteri rekayasa Escherichia coli dengan teknologi rekombinasi gen.Enzim itu sendiri memiliki aktivitas hot-start tertentu dan dapat digunakan untuk PCR dan qPCR konvensional;ia memiliki aktivitas DNA polimerase 5'→3' dan aktivitas eksonuklease 5'→3', tetapi tidak ada aktivitas eksonuklease 3'→5'.
Komponen kit
| Komponen | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Taq DNA Polimerase Foreasy(5 U/µL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2× Penyangga Reaksi Taq | 25 ml ×5 | 250 ml ×5 | 500 mL ×25 |
Fitur & keuntungan
- Spesifisitas tinggi: Enzim memiliki aktivitas hot-start tertentu.
- Amplifikasi Cepat: 10 dtk/kb .
- Template yang sangat mudah beradaptasi: dapat digunakan untuk memperkuat GC bernilai tinggi secara efisien, berbagai template DNA yang sulit untuk diamplifikasi.
- Kesetiaan yang kuat: Enzim Taq biasa 6 kali.
- Stabilitas termal yang kuat: Dapat ditempatkan pada suhu 37 °C selama seminggu dan mempertahankan lebih dari 90% aktivitas
Aplikasi kit
Berbagai sistem PCR/qPCR dan sistem PCR langsung
Amplifikasi PCR fragmen DNA
pelabelan DNA
pengurutan DNA
PCR berekor A
Definisi U
1U: Jumlah enzim yang diperlukan untuk memasukkan 10 nmol deoksinukleotida ke dalam zat yang tidak larut dalam asam menggunakan DNA sperma salmon aktif sebagai templat/primer selama 30 menit pada suhu 74°C.
Kondisi Reaksi
| Suhu | Waktu | Siklus |
| 37°C | 5 menit | 1 |
| 94°C | 5 menit | 1 |
| 94°C | 10 detik | 35 |
| 60°C | 10 detik | |
| 72°C | 20 detik/kb | |
| 72°C | 2 menit | 1 |
Penyimpanan
-20 ± 5 °C selama 2 tahun atau -80 °C untuk penyimpanan jangka panjang.
Tidak ada sinyal amplifikasi
1. Taq DNA Polymerase dalam kit kehilangan aktivitasnya karena penyimpanan yang tidak tepat atau kedaluwarsa kit.
Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan kit;tambahkan kembali Taq DNA Polymerase dalam jumlah yang sesuai ke sistem PCR atau beli Kit PCR Real Time baru untuk eksperimen terkait.
2. Ada banyak penghambat Taq DNA Polymerase dalam cetakan DNA.
Saran: Repurifikasi template atau kurangi jumlah template yang digunakan.
3. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR Mix yang kami sediakan adalah 3,5mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Jumlah template terlalu sedikit atau terlalu banyak.
Rekomendasi: Lakukan pengenceran gradien linearisasi template, dan pilih konsentrasi template dengan efek PCR terbaik untuk percobaan PCR Real Time.
NTC memiliki nilai fluoresensi terlalu tinggi
1.Kontaminasi reagen yang disebabkan selama operasi.
Rekomendasi: Ganti dengan reagen baru untuk eksperimen Real Time PCR.
2.Kontaminasi terjadi selama persiapan sistem reaksi PCR.
Rekomendasi: Lakukan tindakan perlindungan yang diperlukan selama pengoperasian, seperti: mengenakan sarung tangan lateks, menggunakan ujung pipet dengan filter, dll.
3. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan amplifikasi non-spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
Dimer primer atau amplifikasi non-spesifik
1. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR EasyTM Mix yang kami sediakan adalah 3,5 mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
2. Suhu anil PCR terlalu rendah.
Saran: Tingkatkan suhu anil PCR sebesar 1℃ atau 2℃ setiap kali.
3.Produk PCR terlalu panjang.
Rekomendasi: Panjang produk Real Time PCR sebaiknya antara 100-150bp, tidak lebih dari 500bp.
4. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan munculnya amplifikasi spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
Pengulangan nilai kuantitatif yang buruk
1. Instrumen tidak berfungsi.
Saran: Mungkin ada kesalahan di antara setiap lubang PCR instrumen, yang mengakibatkan reproduksibilitas yang buruk selama manajemen atau deteksi suhu.Silakan periksa sesuai dengan instruksi dari instrumen yang sesuai.
2. Kemurnian sampel tidak baik.
Rekomendasi: Sampel yang tidak murni akan menyebabkan reproduktifitas percobaan yang buruk, yang mencakup kemurnian template dan primer.Yang terbaik adalah memurnikan ulang template, dan primer paling baik dimurnikan dengan SDS-PAGE.
3. Waktu persiapan dan penyimpanan sistem PCR terlalu lama.
Saran: Gunakan sistem Real Time PCR untuk percobaan PCR segera setelah persiapan, dan jangan terlalu lama didiamkan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
