Kit Isolasi RNA Total Sel Kit Pemurnian Isolasi RNA Total dari sel
Keterangan Kit:
Total RNA yang sangat murni dan berkualitas tinggi dapat diperoleh dari berbagai sel yang dikultur dalam 11 menit.
Bebas RNase
Dioperasikan pada suhu kamar (15-25℃)
Dengan Kolom Pembersihan DNA
Hasil RNA tinggi
Cepat: Selesaikan ekstraksi dalam 11 menit
Keamanan: Tidak ada Bahan kimia organik
Keterangan
Kit ini menggunakan spin column dan formula yang dikembangkan oleh Foregene, yang secara efisien dapat mengekstraksi total RNA dengan kemurnian tinggi dan kualitas tinggi dari sel yang dikultur dalam pelat 96, 24, 12, dan 6 lubang.
Kit ini menyediakan Kolom Pembersih DNA yang efisien, yang dapat dengan mudah memisahkan supernatan dan lisat sel, mengikat dan menghilangkan DNA genomik.Pengoperasiannya sederhana dan hemat waktu.
TKolom khusus RNA dapat secara efisien mengikat RNA dengan formula unik.Sejumlah besar sampel dapat diproses secara bersamaan.
Komponen kit
| Komposisi kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Penyangga cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Penyangga cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Penyangga RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Penyangga RW2 | 24 mL | 96 mL |
| ddH2O Bebas RNase | 10 mL | 40 mL |
| Kolom Hanya RNA | 50 | 200 |
| Kolom Pembersihan DNA | 50 | 200 |
| Petunjuk | 1 | 1 |
* Harap kenakan sarung tangan dan lakukan tindakan perlindungan selama pengoperasian karena Buffer cRL1 dan Buffer RW1 mengandung garam chaotropic yang mengiritasi.
Fitur & keuntungan
■ Seluruh proses dioperasikan pada suhu kamar (15-25℃), tanpa penangas es dan sentrifugasi suhu rendah.
■ Seluruh kit bebas RNase, tidak perlu khawatir tentang degradasi RNA.
■ Kolom Pembersih DNA secara khusus mengikat DNA, sehingga kit dapat menghilangkan kontaminasi DNA genomik tanpa menambahkan DNase tambahan.
■ Hasil RNA tinggi: Kolom khusus RNA dan formula unik dapat memurnikan RNA secara efisien.
■ Kecepatan cepat: mudah dioperasikan dan dapat diselesaikan dalam 11 menit.
■ Keamanan: Tidak diperlukan reagen organik.
■ Kualitas tinggi: RNA yang dimurnikan memiliki kemurnian tinggi, bebas protein dan pengotor lainnya, dan dapat memenuhi berbagai percobaan berikutnya.
Aplikasi kit
Sangat cocok untuk ekstraksi dan pemurnian RNA total dari sel yang dikultur dalam pelat 96, 24, 12, dan 6 sumur.
Aliran kerja
Diagram
Diagram baterai gel agarosa dari Kit Isolasi RNA Total Sel memperlakukan jumlah sel yang berbeda di atas, elusi volume 20μl, ambil 2μl total RNA murni 1%.
Penyimpanan dan umur simpan
Kit dapat disimpan selama 12 bulan pada suhu kamar (15–25 ℃) atau 2–8 ℃ untuk waktu yang lebih lama (24 bulan).
Buffer cRL1 dapat disimpan pada 4 ℃ selama 1 bulan setelah menambahkan 2-hidroksi-1-ethanethiol (opsional).
RNA tidak diekstraksi atau hasil RNA rendah
Seringkali terdapat berbagai faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel jaringan, metode operasi, volume elusi, dll.
1. Pemandian es atau sentrifugasi kriogenik (4 °C) dilakukan selama pengoperasian.
Rekomendasi: Operasikan pada suhu kamar (15-25 ° C) selama seluruh proses, jangan penangas es dan centrifuge pada suhu rendah.
2. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau waktu penyimpanan sampel yang berlebihan.
Rekomendasi: Simpan sampel pada suhu -80 °C atau bekukan dalam nitrogen cair dan hindari penggunaan beku-cair berulang kali;coba gunakan jaringan segar atau sel biakan untuk ekstraksi RNA.
3. Lisis sampel tidak mencukupi.
Rekomendasi: Saat menghomogenkan jaringan, pastikan bahwa jaringan cukup homogen dan sel-sel jaringan cukup terpisah untuk menjelaskan pelepasan RNA.
4. Eluen tidak ditambahkan dengan benar.
Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa ddH Bebas RNase2O ditambahkan tetes demi tetes ke tengah membran kolom pemurnian.
5. Volume etanol absolut yang benar tidak ditambahkan ke Buffer RL2 atau Buffer RW2.
Rekomendasi: Ikuti instruksi, tambahkan etanol absolut dengan volume yang benar ke Buffer RL2 dan Buffer RW2 dan aduk rata sebelum menggunakan kit.
6. Dosis sampel jaringan tidak sesuai.
Anjuran : Gunakan 10-20 mg tissue atau (1-5)×106sel per 500 μl buffer RL1, karena penggunaan jaringan yang berlebihan dapat mengakibatkan berkurangnya ekstraksi RNA.
7. Volume elusi tidak tepat atau elusi tidak lengkap.
Rekomendasi: Volume elusi kolom pemurnian adalah 50-200 μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk memperpanjang waktu penempatan suhu kamar setelah menambahkan ddH Bebas RNase-Free yang dipanaskan sebelumnya2O, misalnya selama 5-10 menit.
8. Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah pencucian Buffer RW2.
Rekomendasi: Jika terdapat residu etanol setelah pencucian Buffer RW2, sentrifugasi tabung kosong selama 1 menit, waktu operasi sentrifugasi tabung kosong dapat ditingkatkan menjadi 2 menit, atau kolom pemurnian dapat ditempatkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan sisa etanol secara memadai.
RNA murni terdegradasi
Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti pengawetan sampel, kontaminasi RNase, dan manipulasi, dll.
1. Sampel jaringan tidak disimpan tepat waktu.
Rekomendasi: Jika sampel jaringan atau sel tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, segera lakukan kriopreservasi pada suhu -80 °C atau nitrogen cair.Untuk mengekstraksi RNA, gunakan sampel jaringan atau sel yang baru diambil jika memungkinkan.
2. Sampel jaringan yang dibekukan berulang kali.
Rekomendasi: Saat menyimpan sampel jaringan, yang terbaik adalah memotongnya menjadi potongan-potongan kecil untuk pengawetan, dan membuang salah satu potongan saat menggunakannya untuk menghindari pembekuan berulang pada sampel dan degradasi RNA.
3. RNase diperkenalkan atau tidak memakai sarung tangan sekali pakai, masker, dll selama operasi.
Rekomendasi: Eksperimen ekstraksi RNA paling baik dilakukan di ruang manipulasi RNA terpisah dan meja dibersihkan sebelum eksperimen.
Kenakan sarung tangan dan masker sekali pakai selama percobaan untuk meminimalkan degradasi RNA yang disebabkan oleh masuknya RNase.
4. Reagen terkontaminasi RNase selama penggunaan.
Rekomendasi: Ganti dengan Kit Isolasi RNA Total Hewan baru untuk eksperimen terkait.
5. Tabung centrifuge, tip, dll. yang digunakan dalam manipulasi RNA terkontaminasi dengan RNase.
Rekomendasi: Pastikan tabung sentrifus, tip, pipet, dll. yang digunakan dalam ekstraksi RNA semuanya Bebas RNase.
RNA yang diperoleh yang dimurnikan memengaruhi eksperimen hilir
RNA dimurnikan oleh kolom pemurnian, jika ion garam, kandungan protein terlalu besar akan mempengaruhi percobaan hilir, seperti: transkripsi terbalik,Northern Blot et al.
1. RNA yang dielusi memiliki residu ion garam.
Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa volume etanol yang benar telah ditambahkan ke Buffer RW2 dan lakukan 2 pencucian kolom pemurnian pada kecepatan sentrifugal yang ditunjukkan untuk pengoperasian;jika ada residu ion garam, tinggalkan kolom pemurnian ke Buffer RW2 selama 5 menit pada suhu kamar dan lakukan sentrifugasi untuk memaksimalkan penghilangan kontaminasi garam.
2. Residu etanol dalam RNA yang dielusi.
Rekomendasi: Pastikan setelah pencucian buffer RW2, lakukan operasi sentrifugasi tabung kosong pada kecepatan sentrifugasi yang ditunjukkan untuk operasi, tingkatkan waktu operasi sentrifugasi tabung kosong menjadi 2 menit jika masih ada residu etanol, atau biarkan pada suhu kamar selama 5 m
