Rasio A260/A230 yang rendah biasanya disebabkan oleh pengotor dengan panjang gelombang serapan maksimum pada 230nm.Mari kita lihat apa saja pengotor ini:

• Polutan umum	Panjang gelombang penyerapan	Efek rasio
  Protein	~230nm dan 280nm	Pengurangan serentak A260/A 280dan A260/A 280rasio
  garam guanidin	220-240 nm	Kurangi A260/A 280perbandingan
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm dan 270nm	Kurangi A260/A 280perbandingan
  EDTA	~230nm	Kurangi A260/A 280perbandingan
  Etanol	230-240 nm	Kurangi A260/A 280perbandingan

 
 
 
Panjang gelombang penyerapan dan nilai kontras polutan umum

Pkontaminasi rotein
Pencemaran protein dapat dikatakan sebagai pencemaran paling umum dalam proses ekstraksi asam nukleat.Protein berada di antara fase air atas dan fase bawahorganikfase .Polusi akan mengurangi rasio A260/A280 dan A260/A230 secara bersamaan, dan rasio A260/A230 akan berubah lebih jelas daripada rasio A260/A280.
Selama selanjutnyatranskripsi terbalikor reaksi qPCR, residu protein dapat menghambat atau mengganggu fungsi enzim.Cara terbaik untuk menghindari kontaminasi protein adalah dengan mengingat prinsip “kurang dari lebih, jumlah kecil berkali-kali” saat mengaspirasi supernatan.

2. polusi Guanidinium
hidroklorida (GuHCl) dan guanidine thiocyanate (GTC) memiliki efek mendenaturasi protein, yang dapat dengan cepat menghancurkan membran sel selama proses ekstraksi asam nukleat, menyebabkan denaturasi dan pengendapan protein.Panjang gelombang serapan GuHCl dan GTC adalah antara 220-240 nm, dansisa garam guanidinium akan mengurangi rasio A260/A230.Meskipun sisa garam guanidinium akan mengurangi rasionya,dampak pada eksperimen hilir sebenarnya dapat diabaikan.

3. Kontaminasi Trizol
Komponen utama Trizol adalah fenol.Fungsi utama fenol adalah melisiskan sel dan melepaskan protein dan zat asam nukleat di dalam sel.Meskipun fenol dapat secara efektif mendenaturasi protein, fenol tidak dapat sepenuhnya menghambat aktivitas RNase.Oleh karena itu, 8-hidroksikuinolin, guanidin isotiosianat, β-merkaptoetanol, dll ditambahkan ke TRIzol untuk menghambat RNase endogen dan eksogen.
Saat mengekstraksi RNA seluler, Trizol dapat dengan cepat melisiskan sel dan menghambat pelepasan nuklease dari sel, dan sisa Trizol akan secara signifikan mengurangi rasio A260/A230.
Metode pengolahan: Saat melakukan sentrifugasi, harus diperhatikan bahwa fenol dalam Trizol mudah larut dalam fase air pada kondisi 4° dan suhu kamar.

4. Residu etanol
Etanol digunakan dalam proses akhir untuk mengendapkan DNA sambil melarutkan ion garam yang mungkin terikat pada DNA.Penyerapan panjang gelombang tertinggipuncak penyerapanetanol juga pada 230-240 nm, yang manajuga akan mengurangi rasio A260/A230.
Metode untuk menghindari residu etanol dapat diulangi dua kali selama elusi akhir, dengan meniupnyatudung asapselama dua menit agar etanol menguap sepenuhnya sebelum menambahkan buffer untuk elusi.
Namun, perlu diketahui bahwa rasio hanyalah indeks evaluasi kualitas RNA.Jika operasi yang disebutkan di atas diatur secara ketat, penyimpangan antara rasio dan rentang standar tidak akan berdampak besar pada eksperimen hilir.
Produk-produk terkait:
Kit Isolasi RNA Total Hewan
Kit Isolasi RNA Total Tanaman
Kit Isolasi RNA Total Sel
Kit Isolasi RNA Total Tanaman Plus