Kit Isolasi RNA Total Tanaman Plus Kit Pemurnian RNA Total untuk Tanaman Kaya Polisakarida dan Polifenol
Keterangan Kit:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Untuk pemurnian RNA total dari sampel tumbuhan umum yang mengandung komponen polisakarida dan polifenol tinggi.
Ekstrak total RNA berkualitas tinggi dengan cepat dari sampel tanaman dengan kandungan polisakarida dan polifenol yang tinggi.
Bebas RNase Menggunakan Kolom Pembersih DNA
Sederhana—semua operasi diselesaikan pada suhu kamar
Cepat—operasi dapat diselesaikan dalam 30 menit
Aman—tidak ada reagen organik yang digunakan 
Spesifikasi
50 Persiapan, 200 Persiapan
Kit ini menggunakan spin column dan formula yang dikembangkan oleh Foregene, yang secara efisien dapat mengekstrak RNA total kemurnian tinggi dan kualitas tinggi dari berbagai jaringan tanaman dengan kandungan polisakarida atau polifenol tinggi.Ini menyediakan kolom Pembersihan DNA yang dapat dengan mudah menghilangkan DNA genom dari supernatan dan lisat jaringan.Kolom khusus RNA dapat secara efektif mengikat RNA.Kit ini dapat memproses sampel dalam jumlah besar secara bersamaan.
Seluruh sistem tidak mengandung RNase, sehingga RNA yang dimurnikan tidak akan terdegradasi.Buffer PRW1 dan Buffer PRW2 dapat memastikan bahwa RNA yang diperoleh tidak terkontaminasi oleh protein, DNA, ion, dan senyawa organik.
Komponen kit
| Penyangga PSL1, Penyangga PS, Penyangga PSL2 |
| Penyangga PRW1, Penyangga PRW2 |
| ddH bebas RNase2O, Kolom Pembersihan DNA |
| Kolom Hanya RNA |
Fitur & keuntungan
■ Operasi pada suhu kamar (15-25℃) selama seluruh proses, tanpa penangas es dan sentrifugasi suhu rendah.
■ Kit lengkap Bebas RNase, tidak perlu khawatir tentang degradasi RNA.
■ Sangat cocok untuk pemurnian RNA dari sampel tanaman polisakarida dan polifenol.
■ Kolom Pembersih DNA secara khusus berikatan dengan DNA, sehingga kit dapat menghilangkan kontaminasi DNA genomik tanpa menambahkan DNase.
■ Hasil RNA tinggi: Kolom khusus RNA dan formula unik dapat memurnikan RNA secara efisien.
■ Kecepatan cepat: mudah dioperasikan dan dapat diselesaikan dalam waktu 30 menit.
■ Keamanan: tidak diperlukan reagen organik.
■ Kualitas tinggi: Fragmen RNA yang dimurnikan memiliki kemurnian tinggi, bebas protein dan pengotor lainnya, dan dapat memenuhi berbagai aplikasi eksperimental hilir.
Parameter produk
■ Aplikasi hilir: sintesis cDNA untai pertama, RT-PCR, kloning molekuler, Northern Blot, dll.
■ Contoh: Jaringan tanaman segar atau beku dari polisakarida dan polifenol
■ Dosis: 50mg jaringan tanaman
■ Kapasitas pengikatan RNA maksimum kolom pemurnian: 80 μg
■ Volume elusi: 50-200 μl
Aplikasi kit
Sangat cocok untuk ekstraksi dan pemurnian RNA total dari sampel jaringan tanaman segar atau beku (terutama jaringan daun tanaman segar) dengan kandungan polisakarida dan polifenol yang tinggi.
Aliran kerja
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus memproses 50mg daun segar polisakarida dan polifenol, dan 5% RNA murni diuji dengan elektroforesis.
1: Pisang
2: Ginkgo
3: Kapas
4: Delima
Penyimpanan dan Umur simpan
Kit ini dapat disimpan selama 24 bulan dalam kondisi kering pada suhu kamar (15-25℃);jika perlu disimpan lebih lama, dapat disimpan dalam 2–8 ℃.
Buffer PSL1 dapat ditempatkan pada suhu 4℃ selama 1 bulan setelah menambahkan β-mercaptoethanol (disarankan untuk menambahkannya bersamaan dengan percobaan).
Kolom terpasang
Setelah kolom terpasang, hasil RNA berkurang atau bahkan tidak mungkin untuk memurnikan RNA, dan massa RNA yang diperoleh rendah.
Analisis penyebab umum:
1. Pemecahan sampel tidak menyeluruh.
Kerusakan sampel tidak sepenuhnya menyebabkan KOLOM PEMBERSIH DNA terhalang, sekaligus memengaruhi hasil dan kualitas RNA.Kami merekomendasikan operasi penggilingan cepat dalam nitrogen cair yang cukup saat Anda memecahkan sampel, Cobalah untuk menghancurkan dinding sel sampel, membran sel, dan jaringan lainnya.Untuk sampel tanaman polisakarida poliol, kami sarankan Anda menggunakan Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Saat menyedot supernatan sampel yang terpisah dengan Kolom Pembersih DNA, kemungkinan endapan yang terfragmentasi sel dapat terhirup.
Sedimen terfragmentasi sel yang diambil akan menyebabkan RNA-ONLY Column yang akan tersumbat saat operasi adsorpsi RNA dilakukan (lihat langkah 6).Kami menyarankan Anda dengan hati-hati saat menyedot supernatan ini untuk menghindari terhisapnya sisa-sisa sel.
3. Jumlah sampel awal terlalu banyak.
Penggunaan sampel yang berlebihan akan mengakibatkan fragmentasi sampel yang tidak lengkap atau lisis sel yang tidak lengkap oleh Buffer PSL1, yang mengakibatkan penyumbatan kolom pemurnian selama pemurnian.Kit Isolasi RNA Total Tanaman Setiap sampel operasi yang dimurnikan adalah 50 mg.Untuk sampel tanaman polisakarida poliol, kami sarankan Anda mencoba Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Suhu centrifuge terlalu rendah.
Seluruh proses isolasi dan pemurnian RNA dilakukan pada suhu kamar (20-25°C), kecuali bahwa jaringan sampel rusak oleh nitrogen cair. Suhu beberapa sentrifugal kriogenik lebih rendah dari 20℃, yang dapat menyebabkan penyumbatan Kolom Pembersih DNA dan/atau Kolom Khusus RNA.Jika ini terjadi, setel suhu sentrifus ke 20-25℃, Danpastikan campuran lisis dan/atau supernatan yang ditambahkan etanol dipanaskan terlebih dahulu hingga suhu 37°C.
Tidak ada RNA yang diekstraksi atau hasil RNA rendah
Biasanya ada banyak faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel, metode operasi, volume elusi, dll.
Analisis penyebab umum seperti di bawah ini:
1. Mandi es atau sentrifugasi suhu rendah (4 ° C) dilakukan selama operasi.
Saran: Operasikan pada suhu kamar (15-25°C) di seluruh proses, jangan lakukan penangas es dan sentrifugasi suhu rendah.
2. RNA telah terdegradasi karena pengawetan sampel yang tidak tepat atau pengawetan sampel dalam jangka panjang.
Rekomendasi: Sampel yang baru dikumpulkan harus dibekukan dengan cepat dalam nitrogen cair, dan kemudian disimpan pada suhu -80°C untuk waktu yang lama, hindari pembekuan dan pencairan berulang pada sampel;atau segera rendam sampel dalam larutan RNA stabilizer RNAlater (sampel hewan).
3. Fragmentasi dan lisis sampel yang tidak mencukupi menyebabkan penyumbatan kolom pemurnian.
Saran: Saat menggiling jaringan, harap pastikan bahwa jaringan cukup digiling, dan segera pindahkan ke Buffer PSL1 yang telah disiapkan sebelumnya (pastikan bahwa proporsi β-ME yang benar telah ditambahkan, lihat langkah 1 prosedur).
4.Eluen ditambahkan secara tidak benar.
Saran: Pastikan ddH2O Bebas RNase diteteskan ke tengah membran kolom pemurnian.
5. Volume etanol absolut yang benar tidak ditambahkan ke Buffer PSL2 atau Buffer PRW2.
Saran: Silakan ikuti petunjuknya, tambahkan volume etanol absolut yang benar ke Buffer PSL2 dan Buffer PRW2 dan aduk rata sebelum kit digunakan.
6.Jumlah sampel jaringan tidak sesuai.
Saran: Gunakan 50 mg tisu per 500 μl Buffer PSL1.Menggunakan terlalu banyak jaringan akan mengurangi jumlah RNA yang diekstraksi dan kemurnian RNA yang dihasilkan juga akan berkurang.Kami sangat menganjurkan bahwa dosis sampel awal tidak boleh melebihi 50 mg per operasi ekstraksi RNA.
7.Volume elusi yang tidak sesuai atau elusi yang tidak lengkap.
Saran: Volume eluen kolom pemurnian adalah 50-200 μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk memperpanjang waktu pada suhu kamar setelah menambahkan ddH2O Bebas RNase yang dipanaskan sebelumnya, seperti 5-10 menit.
8. Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah dicuci dengan BufferPRW2.
Saran: Jika tabung kosong disentrifugasi selama 1 menit dan masih ada etanol yang tersisa setelah dicuci dalam Buffer PRW2, Anda dapat menambah waktu sentrifugasi tabung kosong menjadi 2 menit, atau tempatkan kolom pemurnian pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan sisa etanol sepenuhnya.
9. Kit tidak digunakan dengan benar.
Saran: Untuk sampel tanaman polifenol polisakarida, menggunakan kit umum seperti Kit Isolasi RNA Total Tanaman mungkin tidak dapat memperoleh sampel RNA yang ideal.Kami menyarankan Anda untuk menggunakan Plant Total RNA IsolationKit Plus, yang dirancang khusus untuk sampel tanaman polifenol polisakarida.Kit yang dikembangkan khusus untuk mengekstraksi RNA dari sampel tanaman polifenol dan polisakarida.
Nilai OD260/OD280 rendah
Elusi RNA dengan ddH2O dan digunakan untuk pembacaan spektrofotometer menghasilkan nilai OD260/OD280 yang rendah.Kami merekomendasikan penggunaan 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (daripada ddH2O Bebas RNase untuk mengelusi RNA) untuk mendapatkan nilai OD260/OD280 yang relatif benar, lihat “Pengujian Konsentrasi dan Pemurnian RNA” di halaman 19.
RNA murni terdegradasi
Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti pengawetan sampel, kontaminasi RNase, dan manipulasi.
Analisis penyebab umum:
1. Sampel jaringan tidak disimpan tepat waktu setelah pengumpulan.
Rekomendasi: Jika sampel jaringan tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, segera simpan dalam nitrogen cair pada suhu rendah atau pindahkan ke suhu -80°C untuk penyimpanan jangka panjang setelah pembekuan cepat dalam nitrogen cair, atau segera rendam sampel dalam larutan RNA stabilizer RNAlater (sampel hewan).Untuk ekstraksi RNA, coba gunakan sampel jaringan yang baru dikumpulkan.
2. Pembekuan berulang dan pencairan sampel jaringan.
Saran: Saat menyimpan sampel jaringan, yang terbaik adalah memotongnya menjadi potongan-potongan kecil untuk pengawetan, dan mengambil sebagian darinya saat digunakan untuk menghindari degradasi RNA yang disebabkan oleh pembekuan berulang dan pencairan sampel.
3.RNase diperkenalkan di ruang operasi atau tidak memakai sarung tangan sekali pakai, masker, dll.
Saran: Eksperimen ekstraksi RNA paling baik dilakukan dalam operasi RNA terpisah, dan meja laboratorium harus dibersihkan sebelum percobaan, dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai selama percobaan untuk menghindari degradasi RNA yang disebabkan oleh pengenalan RNase secara maksimal.
4. Reagen terkontaminasi oleh RNase saat digunakan.
Saran: Ganti dengan kit ekstraksi RNA total tanaman seri baru untuk eksperimen terkait.
5. Tabung sentrifus dan ujung pipet yang digunakan untuk manipulasi RNA terkontaminasi dengan RNase.
Saran: Pastikan tabung sentrifus, ujung pipet, pipet, dll. yang digunakan dalam ekstraksi RNA semuanya Bebas RNase.
Instruksi Manual:
Kit Isolasi Total RNA Tanaman Plus Instruksi Manual
