Panduan untuk analisis masalah

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Tidak ada RNA yang dapat diekstraksi atau hasil asam nukleat rendah

Biasanya ada banyak faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel, metode operasi, volume elusi, dll.。

Analisis penyebab umum：

1.Penangas es atau sentrifugasi suhu rendah (4 ° C) selama pengoperasian.

Saran: Suhu kamar (15-25 ° C) operasi, tidak pernah mandi es dan centrifuge suhu rendah.

2. Penyimpanan sampel yang tidak tepat atau penyimpanan sampel yang terlalu lama.

Saran: Simpan sampel pada suhu -80 °C atau bekukan dalam nitrogen cair, dan hindari penggunaan freeze-thaw berulang;coba gunakan sampel yang baru dikumpulkan untuk ekstraksi RNA.

3. Sampel lisis tidak mencukupi

Rekomendasi: Harap pastikan bahwa sampel dan larutan kerja (Linear Acrylamide) telah tercampur rata dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar (15-25 ° C)

4.Eluen ditambahkan secara tidak benar

Rekomendasi: Pastikan ddH2O Bebas RNase ditambahkan ke tengah membran kolom pemurnian

5. Volume etanol anhidrat yang tidak tepat dalam Buffer viRW2

Saran: Silakan ikuti petunjuknya, tambahkan volume etanol anhidrat yang benar ke Buffer viRW2 dan campur dengan baik sebelum menggunakan kit。

6. Penggunaan sampel yang tidak tepat.

Saran: 200μl sampel per 500μl Buffer viRL.Volume sampel yang berlebihan akan menghasilkan tingkat ekstraksi RNA yang berkurang.

7. Volume elusi tidak tepat atau elusi tidak lengkap.

Saran: Volume eluen kolom pemurnian adalah 30-50μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk menambahkan ddH Bebas RNase yang telah dipanaskan sebelumnya₂O dan perpanjang waktu dengan menempatkan pada suhu kamar, seperti 5-10 menit

8.Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah dibilas dalam Buffer viRW2.

Saran: Jika etanol masih tersisa setelah pembilasan dalam Buffer viRW2 dan sentrifugasi tabung kosong selama 2 menit, kolom pemurnian dapat dibiarkan pada suhu kamar selama 5 menit setelah sentrifugasi tabung kosong untuk sepenuhnya menghilangkan sisa etanol.

Degradasi molekul RNA murni

Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti penyimpanan sampel, kontaminasi RNase, dan pengoperasian.

Analisis penyebab umum：

1. Sampel yang dikumpulkan tidak disimpan tepat waktu.

Saran: Jika sampel tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, harap segera simpan pada suhu -80 ℃ atau nitrogen cair.Untuk ekstraksi molekul RNA, coba gunakan sampel yang baru dikumpulkan jika memungkinkan.

2. Sampel yang dikumpulkan dibekukan dan dicairkan berulang kali.

Saran: Hindari pembekuan dan pencairan berulang (tidak lebih dari satu kali) selama pengumpulan dan penyimpanan sampel, jika tidak maka rendemen asam nukleat akan menurun.

3.RNase diperkenalkan di ruang operasi atau tidak ada sarung tangan sekali pakai, masker, dll.

Saran: Percobaan ekstraksi molekul RNA sebaiknya dilakukan di ruang operasi RNA yang terpisah, dan meja percobaan dibersihkan sebelum percobaan.Kenakan sarung tangan dan masker sekali pakai selama percobaan untuk menghindari degradasi RNA yang disebabkan oleh pengenalan RNase.

4. Reagen terkontaminasi oleh RNase selama penggunaan.

Saran: Ganti dengan Viral RNA Isolation Kit baru untuk eksperimen terkait.

5. Kontaminasi RNase pada tabung sentrifus, ujung pipet, dll. Saran: Pastikan tabung sentrifus, ujung pipet, dan ujung pipet semuanya Bebas RNase.

Molekul RNA yang dimurnikan memengaruhi eksperimen hilir

Molekul RNA yang dimurnikan oleh kolom pemurnian akan memengaruhi eksperimen hilir jika terlalu banyak ion garam atau protein, seperti: transkripsi terbalik, Noda Utara, dll.。

1.Ada sisa ion garam dalam molekul RNA yang dielusi.

Rekomendasi: Pastikan volume yang tepat dari etanol anhidrat telah ditambahkan ke Buffer viRW2, dan cuci kolom pemurnian dua kali sesuai dengan kecepatan sentrifugasi yang benar pada instruksi pengoperasian;Jika masih ada ion garam yang tersisa, Anda dapat menambahkan Buffer viRW2 ke kolom pemurnian, dan biarkan pada suhu kamar selama 5 menit.Kemudian lakukan sentrifugasi untuk menghilangkan kontaminasi ion garam secara maksimal

2. Ada sisa etanol dalam molekul RNA yang dielusi

Saran: setelah memastikan bahwa kolom pemurnian telah dibilas dengan Buffer viRW2, lakukan sentrifugasi tabung kosong sesuai dengan kecepatan sentrifugal pada instruksi pengoperasian.Jika masih ada etanol yang tersisa, dapat dibiarkan selama 5 menit pada suhu kamar setelah sentrifugasi tabung kosong untuk menghilangkan sisa etanol secara maksimal.

Instruksi Manual:

Manual Instruksi Kit Isolasi RNA Virus