Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits Probe
Deskripsi
Produk ini menggunakan sistem buffer lisis yang unik untuk melepaskan RNA dengan cepat dari sampel sel yang dikultur untuk reaksi RT-qPCR, menghilangkan proses pemurnian RNA yang memakan waktu dan melelahkan, dan hanya 7 menit untuk mendapatkan template RNA yang diperlukan, dengan 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman yang disediakan oleh kit dapat dengan cepat dan efisien memperoleh hasil PCR kuantitatif waktu nyata.
5× Direct RT Mix dan 2× Direct qPCR Mix-Taqman memiliki toleransi inhibitor yang kuat dan dapat melakukan pembalikan yang efisien dan amplifikasi spesifik menggunakan lisat sampel yang akan diukur sebagai template.Reagen mengandung Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer dan Stabilizer, yang dapat digunakan dengan buffer lisis untuk mendeteksi sampel dengan cepat dan mudah, serta memiliki karakteristik sensitivitas, spesifisitas, dan stabilitas yang tinggi.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponen kit
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Komponen kit Sistem Reaksi qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Catatan | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Bagian I | Penyangga CL | 4 ml | 20 ml | Lisis Sel |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Penyangga ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Bagian II | Penghapus DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×RT Campuran Langsung * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| Pewarna Referensi 20×ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instruksi manual | 1 buah | 1 buah | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman dapat dibeli secara terpisah
Fitur & keuntungan
■Sederhana dan efektif : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA dapat diperoleh hanya dalam 7 menit.
■ Permintaan sampel kecil, serendah 10 sel dapat diuji.
■ Throughput tinggi: dapat dengan cepat mendeteksi RNA dalam sel yang dikultur dalam pelat 384, 96, 24, 12, 6 sumur.
■ Penghapus DNA dapat dengan cepat menghapus genom yang dilepaskan, sangat mengurangi dampak pada hasil percobaan berikutnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimalkan menjadikan transkripsi balik RT-PCR dua langkah lebih efisien dan PCR lebih spesifik, serta lebih tahan terhadap penghambat reaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel berbudaya.
- RNA dirilis oleh lisis sampel: hanya berlaku untuk template RT-qPCR dari kit ini.
- Kit ini dapat digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, verifikasi efek pembungkaman gen yang dimediasi siRNA, skrining obat, dll.
Penyimpanan dan Umur simpan
Bagian I kit ini harus disimpan di 4℃;Bagian II harus disimpan pada -20 ℃.
Foregene Protease Plus II harus disimpan pada 4℃, jangan dibekukan pada -20℃.
Reagen 2×Mix-Taqman qPCR langsung harus disimpan di -20℃dalam gelap;jika sering digunakan, bisa juga disimpan di 4℃ untuk penyimpanan jangka pendek (habiskan dalam 10 hari).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer dan Reverse Primer
Untuk Real Time PCR, desain primer sangat penting.Primer terkait dengan spesifisitas dan efisiensi amplifikasi PCR, dan dapat dirancang dengan mengacu pada prinsip-prinsip berikut:
- Panjang primer: 18-30bp.
- Konten GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Perangkat lunak desain primer, seperti Primer 5, dapat memberikan nilai Tm dari primer.Nilai Tm primer upstream dan downstream harus sedekat mungkin.Rumus perhitungan Tm juga dapat digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Saat melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C umumnya dipilih sebagai suhu anil (peningkatan suhu anil yang sesuai dapat meningkatkan spesifisitas reaksi PCR).
- Produk primer dan PCR:
- Panjang produk amplifikasi PCR desain primer sebaiknya 100-150bp.
- Primer desain di area struktural sekunder dari template harus dihindari sebisa mungkin.
- Hindari pembentukan 2 atau lebih basa komplementer antara ujung 3′ primer hulu dan hilir.
- Basis terminal Primer 3′ tidak dapat hadir dengan 3 tambahan berturut-turut G atau C.
- Primer itu sendiri tidak dapat memiliki struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, yang memengaruhi amplifikasi PCR.
- ATCG harus didistribusikan secara merata dalam urutan primer, dan basis terminal 3′ harus dihindari seperti T.
Lampiran1：Cell LangsungRT-qPCR Komponen kitpaket suplemen t
1. Solusi Lisis Sel
| Solusi Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24-sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| BagianSAYA | Penyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Penghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Campuran RT | |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Langsung | 800 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| campuran qPCR | ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Pewarna Referensi ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
