(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Deskripsi
Itu(96-baik) QuickEasyTM Kit RT-qPCR Sel Langsung–SYBR Hijau Imenyediakansistem buffer lisis yang unikto melepaskan RNA dengan cepatdari sel biakansampel untuk reaksi RT-qPCR, menghilangkan memakan waktu dan melelahkanProses pemurnian RNA, dan hanya membutuhkan waktu 7 menit untuk mendapatkan template RNA yang dibutuhkan.Itu5× Campuran RT LangsungDan2× Langsung qPCR Mix-SYBRdisediakan di dalam kotak dapat dengan cepat dansecara efektif memperoleh kuantitatif real-timehasil PCR.
5× Direct RT Mix dan 2× Direct qPCR Mix-SYBR memiliki toleransi penghambat yang kuat, dan dapat menggunakan lisat sampel untuk diuji sebagai templat untuk transkripsi balik yang efisien dan amplifikasi spesifik.Reagen mengandung Foregene Unique Reverse Transcriptase dengan afinitas tinggi untuk RNA , serta Hot D-Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , buffer reaksi, pengoptimal dan penstabil PCR , dan dapat digunakan bersama dengan buffer lisis untuk mendeteksi sampel dengan cepat, mudah dan akurat, dan memiliki karakteristik sensitivitas tinggi, spesifisitas yang kuat, dan stabilitas yang baik.
Kit ini ditujukan untuk lisis sistem mikro dari 96 sel yang dikultur dengan baik, dan memiliki keseragaman dan konsistensi yang baik;komponen kit menyediakan 96 reaksi lisis, 96 reaksi transkripsi balik, dan reaksi qPCR 96x2, yang dapat memenuhi pelat sel 96-sumur untuk penggunaan satu kali, menghindari polusi yang disebabkan oleh pembukaan berulang, pembekuan dan pencairan reagen dan degradasi kinerja reagen.
Komponen kit
| Komposisi kit ( 50 μSistem lisis L/20 μLRT sistem reaksi /20μSistem reaksi L qPCR) | DRT-03011 | Komentar | |
| 96T | |||
| BagianI | PenyanggaCL | 5 mL | SelLisis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PenyanggaST | 500 μL | ||
| Bagian II | DNAPenghapus | 100 μL | |
| 5× Campuran RT Langsung | 400 μL | RT | |
| 2× Campuran qPCR langsung-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× Pewarna Referensi ROX | 400µL | ||
| RNase- BebasddH2 O | 1,7mL |
| |
| Mtahunan | 1 bagian | 1 porsi | |
*: Penghapus DNA reagen lisis termasuk dalam Bagian II kit;Komponen Cell Lysis, RT, dan qPCR dapat dibeli secara terpisah.
Fitur & keuntungan
■Sederhana dan efektif : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA dapat diperoleh hanya dalam 7 menit.
■ Permintaan sampel kecil, serendah 10 sel dapat diuji.
■ Throughput tinggi: dapat dengan cepat mendeteksi RNA dalam sel yang dikultur dalam pelat 384, 96, 24, 12, 6 sumur.
■ Penghapus DNA dapat dengan cepat menghapus genom yang dilepaskan, sangat mengurangi dampak pada hasil percobaan berikutnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimalkan menjadikan transkripsi balik RT-PCR dua langkah lebih efisien dan PCR lebih spesifik, serta lebih tahan terhadap penghambat reaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel berbudaya.
- RNA dirilis oleh lisis sampel: hanya berlaku untuk template RT-qPCR dari kit ini.
- Kit ini dapat digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, verifikasi efek pembungkaman gen yang dimediasi siRNA, skrining obat, dll.
Penyimpanan dan Umur simpan
Bagian I kit ini harus disimpan di 4℃;Bagian II harus disimpan pada -20 ℃.
Foregene Protease Plus II harus disimpan pada 4℃, jangan dibekukan pada -20℃.
Reagen 2×Mix-Taqman qPCR langsung harus disimpan di -20℃dalam gelap;jika sering digunakan, bisa juga disimpan di 4℃ untuk penyimpanan jangka pendek (habiskan dalam 10 hari).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer dan Reverse Primer
Untuk Real Time PCR, desain primer sangat penting.Primer terkait dengan spesifisitas dan efisiensi amplifikasi PCR, dan dapat dirancang dengan mengacu pada prinsip-prinsip berikut:
- Panjang primer: 18-30bp.
- Konten GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Perangkat lunak desain primer, seperti Primer 5, dapat memberikan nilai Tm dari primer.Nilai Tm primer upstream dan downstream harus sedekat mungkin.Rumus perhitungan Tm juga dapat digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Saat melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C umumnya dipilih sebagai suhu anil (peningkatan suhu anil yang sesuai dapat meningkatkan spesifisitas reaksi PCR).
- Produk primer dan PCR:
- Panjang produk amplifikasi PCR desain primer sebaiknya 100-150bp.
- Primer desain di area struktural sekunder dari template harus dihindari sebisa mungkin.
- Hindari pembentukan 2 atau lebih basa komplementer antara ujung 3′ primer hulu dan hilir.
- Basis terminal Primer 3′ tidak dapat hadir dengan 3 tambahan berturut-turut G atau C.
- Primer itu sendiri tidak dapat memiliki struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, yang memengaruhi amplifikasi PCR.
- ATCG harus didistribusikan secara merata dalam urutan primer, dan basis terminal 3′ harus dihindari seperti T.
Lampiran1：Cell LangsungRT-qPCR Komponen kitpaket suplemen t
1. Solusi Lisis Sel
| Solusi Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24-sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| BagianSAYA | Penyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Penghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Campuran RT | |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Langsung | 800 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| campuran qPCR | ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Pewarna Referensi ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
