Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Keterangan Kit:
◮Sederhana—2× PCR Mix untuk mengurangi kesalahan eksperimental dan waktu pengoperasian
◮Spesifik — buffer yang dioptimalkan dan enzim Taq hot-start dapat mencegah amplifikasi non-spesifik dan pembentukan dimer primer
◮Sensitivitas tinggi—dapat mendeteksi salinan template yang rendah
◮Keserbagunaan yang baik—kompatibel dengan sebagian besar instrumen PCR kuantitatif real-time
Deskripsi Kit
PCR Nyata 2X MudahTMMix-Taqman disediakan oleh Real Time PCR EasyTM-Taqman kit adalah sistem premix baru yang menggunakan probe fluoresen khusus untuk reaksi amplifikasi PCR Waktu Nyata, yang dapat sangat meningkatkan spesifisitas produk dan sensitivitas reaksi.ROX disediakan sebagai pewarna kontrol internal.
2X PCR Nyata MudahTMMix-Taqman mengandung Taq DNA Polymerase hot-start Foregene yang unik.Dibandingkan dengan enzim Taq biasa, ia memiliki keunggulan efisiensi amplifikasi yang tinggi, kemampuan amplifikasi spesifik yang kuat, dan tingkat ketidakcocokan yang rendah.Itu dapat mengurangi amplifikasi non-spesifik dan meningkatkan akurasi PCR.
Spesifikasi
| PCR Waktu Nyata MudahTM-Taqman | ||||
| Komposisi kit (sistem 20μl) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×PCR nyataMudahTMMencampur-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×Pewarna Referensi ROX | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
| ddH Bebas-DNase2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
| Iinstruksi | 1 | 1 | 1 | 1 |
Fitur & keuntungan
■ Sederhana—2X PCR Mix untuk mengurangi kesalahan eksperimental dan waktu operasi
■ Spesifik—buffer yang dioptimalkan dan enzim Taq hot-start dapat mencegah amplifikasi non-spesifik dan pembentukan dimer primer
■ Sensitivitas tinggi—dapat mendeteksi salinan template yang rendah
■ Fleksibilitas yang baik—kompatibel dengan sebagian besar instrumen PCR kuantitatif real-time
Aplikasi kit
analisis qPCR
Aliran kerja
Grafis
Penyimpanan dan umur simpan
Kit ini harus disimpan jauh dari cahaya dan harus disimpan pada suhu -20℃.Jika sering digunakan, juga dapat disimpan pada suhu 4℃ untuk waktu yang singkat (10 hari).
Tidak ada sinyal amplifikasi
1. Taq DNA Polymerase dalam kit kehilangan aktivitasnya karena penyimpanan yang tidak tepat atau kedaluwarsa kit.
Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan kit;tambahkan kembali Taq DNA Polymerase dalam jumlah yang sesuai ke sistem PCR atau beli Kit PCR Real Time baru untuk eksperimen terkait.
2. Ada banyak penghambat Taq DNA Polymerase dalam cetakan DNA.
Saran: Repurifikasi template atau kurangi jumlah template yang digunakan.
3. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR Mix yang kami sediakan adalah 3,5mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Jumlah template terlalu sedikit atau terlalu banyak.
Rekomendasi: Lakukan pengenceran gradien linearisasi template, dan pilih konsentrasi template dengan efek PCR terbaik untuk percobaan PCR Real Time.
NTC memiliki nilai fluoresensi terlalu tinggi
1.Kontaminasi reagen yang disebabkan selama operasi.
Rekomendasi: Ganti dengan reagen baru untuk eksperimen Real Time PCR.
2.Kontaminasi terjadi selama persiapan sistem reaksi PCR.
Rekomendasi: Lakukan tindakan perlindungan yang diperlukan selama pengoperasian, seperti: mengenakan sarung tangan lateks, menggunakan ujung pipet dengan filter, dll.
3. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan amplifikasi non-spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
Dimer primer atau amplifikasi non-spesifik
1. Konsentrasi Mg2+ tidak sesuai.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ dari 2× Real PCR EasyTM Mix yang kami sediakan adalah 3,5 mM.Namun, untuk beberapa primer dan template khusus, konsentrasi Mg2+ mungkin lebih tinggi.Oleh karena itu, Anda dapat langsung menambahkan MgCl2 untuk mengoptimalkan konsentrasi Mg2+.Disarankan untuk meningkatkan Mg2+ 0,5mM setiap kali untuk pengoptimalan.
2. Suhu anil PCR terlalu rendah.
Saran: Tingkatkan suhu anil PCR sebesar 1℃ atau 2℃ setiap kali.
3.Produk PCR terlalu panjang.
Rekomendasi: Panjang produk Real Time PCR sebaiknya antara 100-150bp, tidak lebih dari 500bp.
4. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan munculnya amplifikasi spesifik.
Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan Real Time PCR.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
Pengulangan nilai kuantitatif yang buruk
1. Instrumen tidak berfungsi.
Saran: Mungkin ada kesalahan di antara setiap lubang PCR instrumen, yang mengakibatkan reproduksibilitas yang buruk selama manajemen atau deteksi suhu.Silakan periksa sesuai dengan instruksi dari instrumen yang sesuai.
2. Kemurnian sampel tidak baik.
Rekomendasi: Sampel yang tidak murni akan menyebabkan reproduktifitas percobaan yang buruk, yang mencakup kemurnian template dan primer.Yang terbaik adalah memurnikan ulang template, dan primer paling baik dimurnikan dengan SDS-PAGE.
3. Waktu persiapan dan penyimpanan sistem PCR terlalu lama.
Saran: Gunakan sistem Real Time PCR untuk percobaan PCR segera setelah persiapan, dan jangan terlalu lama didiamkan.
4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.
Saran: pastikan urutan primer sudah benar dan primer belum terdegradasi;jika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba turunkan suhu anil dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.
5.Sistem PCR tidak tepat, atau sistemnya terlalu kecil.
Saran: Sistem reaksi PCR yang terlalu kecil akan menyebabkan akurasi deteksi menurun.Yang terbaik adalah menggunakan sistem reaksi yang direkomendasikan oleh instrumen PCR kuantitatif untuk menjalankan ulang eksperimen PCR Waktu Nyata.
