Kit Isolasi DNA Buccal Swab/FTA Card Kit Ekstraksi atau Pemurnian DNA Genomic dari Buccal Swab
Keterangan Kit:
Cepat memurnikan DNA genomik berkualitas tinggi dari sampel buccal swab/FTA Card.
◮Tidak ada kontaminasi RNase:Kolom Khusus DNA yang disediakan oleh kit memungkinkan untuk menghilangkan RNA dari DNA genomik tanpa menambahkan RNase selama percobaan, mencegah laboratorium terkontaminasi oleh RNase eksogen.
◮Kecepatan cepat:Foregene Protease memiliki aktivitas lebih tinggi daripada protease serupa, dan mencerna sampel jaringan dengan cepat;operasinya sederhana, dan operasi ekstraksi DNA genomik dapat diselesaikan dalam waktu 20-80 menit.
◮Nyaman:Sentrifugasi dilakukan pada suhu kamar, dan tidak diperlukan sentrifugasi suhu rendah 4°C atau presipitasi etanol DNA.
◮Keamanan:Tidak diperlukan ekstraksi reagen organik.
◮Kualitas tinggi:DNA genom yang diekstraksi memiliki fragmen besar, tanpa RNA, tanpa RNase, dan kandungan ion yang sangat rendah, yang dapat memenuhi persyaratan berbagai percobaan.
◮Sistem elusi mikro:Itu dapat meningkatkan konsentrasi DNA genom, yang nyaman untuk deteksi atau eksperimen hilir.
Keterangan
Kit ini memberikan metode yang efisien dan cepat untuk mendapatkan DNA genomik konsentrasi tinggi dari buccal swab dan FTA Card (bercak darah).Menggunakan perusahaan kami'Dengan formula dan kolom putar membran silika khusus DNA yang unik, dikombinasikan dengan Foregene Protease, DNA genomik berkualitas tinggi dengan konsentrasi tinggi dapat diekstraksi dalam 80 menit.Kolom pemurnian kecil yang dirancang khusus mengikat DNA genom, dan DNA dapat dielusi dengan jumlah kecil (15μl) sistem elusi untuk meningkatkan konsentrasi DNA genom yang diperoleh, yang nyaman untuk deteksi atau eksperimen hilir.Kit ini dapat memproses satu atau lebih sampel sekaligus, dan proses pemurnian tidak memerlukan ekstraksi zat organik seperti fenol, kloroform, dan presipitasi isopropanol atau etanol yang memakan waktu, dan pengoperasiannya sederhana dan hemat waktu.
Spesifikasi
50 Persiapan
Komponen kit
| Penyangga ST1 |
| Penyangga ST2 |
| Akrilamida Linier |
| Penyangga PW |
| Penyangga WB |
| Penyangga EB |
| Foregene Protease |
| Kolom Khusus DNA |
| Instruksi |
Fitur & keuntungan
-Tidak ada kontaminasi RNase: Kolom Hanya-DNA yang disediakan oleh kit memungkinkan untuk menghilangkan RNA dari DNA genom tanpa menambahkan RNase selama percobaan, menghindari laboratorium terkontaminasi oleh RNase eksogen.
-Kecepatan cepat: Foregene Protease memiliki aktivitas lebih tinggi daripada protease serupa, mencerna sampel dengan cepat;operasi sederhana.
-Nyaman: Sentrifugasi dilakukan pada suhu kamar, dan tidak perlu sentrifugasi suhu rendah 4°C atau presipitasi etanol DNA.
-Keselamatan: Tidak diperlukan ekstraksi reagen organik.
-Kualitas tinggi: DNA genom yang diekstraksi memiliki fragmen besar, tanpa RNA, tanpa RNase, dan kandungan ion yang sangat rendah, yang dapat memenuhi persyaratan berbagai percobaan.
-Sistem elusi mikro: Dapat meningkatkan konsentrasi DNA genomik, yang nyaman untuk deteksi atau eksperimen hilir.
Aplikasi kit
Sangat cocok untuk pemurnian DNA genomik dari sampel berikut: penyeka bukal, Kartu FTA (noda darah).
Penyimpanan dan Umur simpan
-Kit ini dapat disimpan selama 12 bulan dalam kondisi kering pada suhu kamar (15-25°C);jika perlu disimpan untuk jangka waktu yang lebih lama, dapat disimpan pada suhu 2-8°C.
Catatan: Jika disimpan pada suhu rendah, larutan cenderung mengendap.Sebelum digunakan, pastikan untuk meletakkan larutan di dalam kit pada suhu kamar selama beberapa waktu.Jika perlu, panaskan terlebih dahulu dalam penangas air 37°C selama 10 menit untuk melarutkan endapan, dan campurkan sebelum digunakan.
-Foregene Protease solution memiliki formula unik, yaitu aktif bila disimpan di suhu ruangan dalam waktu lama (3 bulan);aktivitas dan kestabilannya akan lebih baik bila disimpan pada suhu 4°C, sehingga disarankan untuk menyimpannya pada suhu 4°C, ingat jangan disimpan pada suhu -20°C.
Kolom pemurnian tersumbat
Dalam kit ini, dalam operasi ekstraksi DNA genom, kolom pemurnian langsung diserap pada campuran lisis enzimatik sampel tanpa langkah sentrifugasi, dan kolom pemurnian dapat diblokir karena enzimisasi yang tidak lengkap dan viskositas sampel yang tinggi.
Kemungkinan penyebab berikut adalah sebagai berikut:
1. Pencernaan enzimatik sampel jaringan yang tidak lengkap.
Rekomendasi: Waktu pemrosesan sampel Foregene Protease dapat diperpanjang dengan tepat atau supernatan dapat diambil setelah sentrifugasi pada 12.000 rpm (~13.400 × g) selama 5 menit.
2. Penggunaan sampel jaringan yang berlebihan atau jaringan yang besar.
Rekomendasi: Yang terbaik adalah tidak melebihi 1 buccal swab dalam sampel;jika sampel terlalu besar, tingkatkan dosis Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 yang sesuai.
3. Viskositas sampel terlalu tinggi.
Rekomendasi: Sampel dapat diencerkan dengan tepat dengan 10 mM Tris-HCl sebelum ekstraksi DNA genomik.
4. Pecahan kartu darah telah terhisap.
Rekomendasi: Waktu sentrifugasi sementara dari langkah 6 ekstraksi genom bercak darah (Kartu FTA) dapat diperpanjang dengan tepat.
Hasil rendah atau tidak ada DNA
Seringkali ada berbagai faktor yang mempengaruhi hasil DNA genom, termasuk asal sampel, kondisi penyimpanan sampel, persiapan sampel, manipulasi, dll.
DNA genom tidak dapat diperoleh selama ekstraksi
Kemungkinan penyebabnya adalah sebagai berikut:
1. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau penyimpanan yang terlalu lama menyebabkan degradasi DNA genomik.
Rekomendasi: Penyeka oral sebaiknya diambil sampelnya yang baru, dan tidak disarankan menggunakan penyeka yang diawetkan untuk operasi ekstraksi DNA genomik;sampel bercak darah harus memastikan bahwa kualitasnya memenuhi syarat dan waktu penyimpanan tidak boleh terlalu lama.
2. Penggunaan jaringan yang terlalu sedikit dapat mengakibatkan tidak adanya ekstraksi DNA genomik yang sesuai.
Rekomendasi: Ikuti instruksi pengambilan sampel usap bukal dalam panduan operasi, dan seka sebanyak mungkin sehingga cukup banyak sel yang dapat ditempelkan pada swab oral untuk ekstraksi DNA genomik;untuk ekstraksi sampel bercak darah, area pemotongan bercak darah dapat ditingkatkan dengan tepat.
3. Protease Foregene tidak diawetkan dengan benar, mengakibatkan penurunan aktivitas atau inaktivasinya.
Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan Foregene Protease atau ganti dengan Foregene Protease baru untuk reaksi enzimatik.
4. Pengawetan kit yang tidak tepat atau waktu penyimpanan yang terlalu lama, mengakibatkan kegagalan beberapa komponen dalam kit.
Rekomendasi: Beli kit isolasi DNA usap bukal baru untuk prosedur terkait.
5. Buffer WB tidak menambahkan etanol absolut.
Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa buffer WB menambahkan etanol absolut dengan volume yang tepat.
6. Eluen tidak ditambahkan dengan benar ke film silikon.
Rekomendasi: Tambahkan tetes eluen yang sudah dihangatkan pada suhu 65 °C ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk meningkatkan efisiensi elusi.
DNA genom hasil rendah diisolasi
Kemungkinan penyebab berikut adalah sebagai berikut:
1. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau penyimpanan yang terlalu lama menyebabkan degradasi DNA genomik.
Rekomendasi: Penyeka oral lebih disukai diambil sampelnya, dan penyeka yang diawetkan tidak boleh digunakan untuk ekstraksi DNA genomik.
2. Jika jumlah sampel jaringan terlalu sedikit, kandungan DNA genom yang diekstraksi akan lebih sedikit.
Rekomendasi: Ikuti petunjuk pengambilan sampel swab oral dalam panduan pengoperasian, seka sebanyak mungkin sehingga cukup banyak sel yang dapat ditempelkan pada swab oral untuk ekstraksi DNA genomik.
3. Protease Foregene tidak diawetkan dengan benar, mengakibatkan penurunan aktivitas atau inaktivasinya.
Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan Foregene Protease atau ganti dengan Foregene Protease baru untuk reaksi enzimatik.
4. Masalah eluen.
Rekomendasi: Gunakan Buffer EB untuk elusi;jika menggunakan ddH2O atau eluen lain, pastikan pH eluat antara 7,0-8,5.
5. Eluat tidak ditambahkan dengan benar tetes demi tetes.
Rekomendasi: Tambahkan tetesan eluen ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk meningkatkan efisiensi elusi.
6. Cairan elusi menumpuk terlalu sedikit.
Rekomendasi: Gunakan eluen untuk elusi DNA genomik sesuai petunjuk, minimal tidak kurang dari 15 µl.
Kemurnian rendah dari DNA genom yang diisolasi
Kemurnian DNA genomik yang rendah dapat menyebabkan kegagalan atau hasil percobaan hilir yang tidak memuaskan, seperti: enzim tidak dapat dipotong terbuka, PCR tidak dapat memperoleh fragmen gen yang diinginkan, dll.
Kemungkinan penyebabnya adalah sebagai berikut:
1. Polusi heteroprotein, polusi RNA.
Analisis: Kolom pemurnian tidak dicuci menggunakan Buffer PW;kolom pemurnian Buffer PW wash tidak dicuci menggunakan kecepatan sentrifugal yang benar.
Rekomendasi: Pastikan tidak ada pengendapan di supernatan sebelum menambahkan etanol;pastikan untuk mencuci kolom pemurnian sesuai petunjuk, dan langkah ini tidak dapat diabaikan.
2. Polusi ion pengotor.
Analisis: Pencucian buffer WB kolom pemurnian dihilangkan atau dicuci hanya satu kali, menghasilkan sisa kontaminasi ionik.
Rekomendasi: Pastikan untuk mencuci Buffer WB 2 kali sesuai petunjuk untuk menghilangkan sisa ion sebanyak mungkin.
3. Kontaminasi enzim RNA.
Analisis: RNases asing ditambahkan ke buffer;Operasi pencucian Buffer PW salah, menghasilkan residu RNase, memengaruhi operasi eksperimental RNA hilir, seperti transkripsi in vitro.
Rekomendasi: Kit isolasi asam nukleat seri foregene dapat menghilangkan RNA tanpa penambahan RNase tambahan, sehingga Kit Isolasi DNA Kartu Swab/FTA bukal tidak perlu menambahkan RNase;pastikan untuk mengikuti petunjuk untuk kolom pemurnian pencucian Buffer PW, dan langkah ini tidak dapat diabaikan.
4. Residu etanol.
Analisis: Buffer WB tidak melakukan sentrifugasi tabung kosong setelah kolom pemurnian dicuci.
Rekomendasi: Lakukan operasi sentrifugasi tabung kosong yang benar sesuai petunjuk.
5. Polusi pengotor lainnya.
Analisis: Sampel yang disimpan atau sampel khusus tidak diolah terlebih dahulu.
Rekomendasi: Pretreatment sampel secara menyeluruh seperti yang diinstruksikan.
