FAQ untukKit Isolasi RNA Total Hewan

Berikut analisis masalah yang mungkin Anda temuiekstraksi RNA jaringan / sel hewan will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA tidak diekstraksi atau hasil RNA rendah

Seringkali terdapat berbagai faktor yang mempengaruhi efisiensi pemulihan, seperti: konten RNA sampel jaringan, metode operasi, volume elusi, dll.

1. Pemandian es atau sentrifugasi kriogenik (4 °C) dilakukan selama pengoperasian.

Rekomendasi: Operasikan pada suhu kamar (15-25 ° C) selama seluruh proses, jangan penangas es dan centrifuge pada suhu rendah.

2. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau waktu penyimpanan sampel yang berlebihan.

Rekomendasi: Simpan sampel pada suhu -80 °C atau bekukan dalam nitrogen cair dan hindari penggunaan beku-cair berulang kali;coba gunakan jaringan segar atau sel biakan untuk ekstraksi RNA.

3. Lisis sampel tidak mencukupi.

Rekomendasi: Saat menghomogenkan jaringan, pastikan bahwa jaringan cukup homogen dan sel-sel jaringan cukup terpisah untuk menjelaskan pelepasan RNA.

4. Eluen tidak ditambahkan dengan benar.

Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa ddH Bebas RNase₂O ditambahkan tetes demi tetes ke tengah membran kolom pemurnian.

5. Volume etanol absolut yang benar tidak ditambahkan ke Buffer RL2 atau Buffer RW2.

Rekomendasi: Ikuti instruksi, tambahkan etanol absolut dengan volume yang benar ke Buffer RL2 dan Buffer RW2 dan aduk rata sebelum menggunakan kit.

6. Dosis sampel jaringan tidak sesuai.

Anjuran : Gunakan 10-20 mg tissue atau (1-5)×10⁶sel per 500 μl buffer RL1, karena penggunaan jaringan yang berlebihan dapat mengakibatkan berkurangnya ekstraksi RNA.

7. Volume elusi tidak tepat atau elusi tidak lengkap.

Rekomendasi: Volume elusi kolom pemurnian adalah 50-200 μl;jika efek elusi tidak memuaskan, disarankan untuk memperpanjang waktu penempatan suhu kamar setelah menambahkan ddH Bebas RNase-Free yang dipanaskan sebelumnya₂O, misalnya selama 5-10 menit.

8. Kolom pemurnian memiliki residu etanol setelah pencucian Buffer RW2.

Rekomendasi: Jika terdapat residu etanol setelah pencucian Buffer RW2, sentrifugasi tabung kosong selama 1 menit, waktu operasi sentrifugasi tabung kosong dapat ditingkatkan menjadi 2 menit, atau kolom pemurnian dapat ditempatkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk menghilangkan sisa etanol secara memadai.

RNA murni terdegradasi

Kualitas RNA yang dimurnikan terkait dengan faktor-faktor seperti pengawetan sampel, kontaminasi RNase, dan manipulasi, dll.

1. Sampel jaringan tidak disimpan tepat waktu.

Rekomendasi: Jika sampel jaringan atau sel tidak digunakan tepat waktu setelah pengumpulan, segera lakukan kriopreservasi pada suhu -80 °C atau nitrogen cair.Untuk mengekstraksi RNA, gunakan sampel jaringan atau sel yang baru diambil jika memungkinkan.

2. Sampel jaringan yang dibekukan berulang kali.

Rekomendasi: Saat menyimpan sampel jaringan, yang terbaik adalah memotongnya menjadi potongan-potongan kecil untuk pengawetan, dan membuang salah satu potongan saat menggunakannya untuk menghindari pembekuan berulang pada sampel dan degradasi RNA.

3. RNase diperkenalkan atau tidak memakai sarung tangan sekali pakai, masker, dll selama operasi.

Rekomendasi: Eksperimen ekstraksi RNA paling baik dilakukan di ruang manipulasi RNA terpisah dan meja dibersihkan sebelum eksperimen.

Kenakan sarung tangan dan masker sekali pakai selama percobaan untuk meminimalkan degradasi RNA yang disebabkan oleh masuknya RNase.

4. Reagen terkontaminasi RNase selama penggunaan.

Rekomendasi: Ganti dengan Kit Isolasi RNA Total Hewan baru untuk eksperimen terkait.

5. Tabung centrifuge, tip, dll. yang digunakan dalam manipulasi RNA terkontaminasi dengan RNase.

Rekomendasi: Pastikan tabung sentrifus, tip, pipet, dll. yang digunakan dalam ekstraksi RNA semuanya Bebas RNase.

RNA yang diperoleh yang dimurnikan memengaruhi eksperimen hilir

RNA dimurnikan oleh kolom pemurnian, jika ion garam, kandungan protein terlalu besar akan mempengaruhi percobaan hilir, seperti: transkripsi terbalik,Northern Blot et al.

1. RNA yang dielusi memiliki residu ion garam.

Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa volume etanol yang benar telah ditambahkan ke Buffer RW2 dan lakukan 2 pencucian kolom pemurnian pada kecepatan sentrifugal yang ditunjukkan untuk pengoperasian;jika ada residu ion garam, tinggalkan kolom pemurnian ke Buffer RW2 selama 5 menit pada suhu kamar dan lakukan sentrifugasi untuk memaksimalkan penghilangan kontaminasi garam.

2. Residu etanol dalam RNA yang dielusi.

Rekomendasi: Pastikan setelah pencucian buffer RW2, lakukan operasi sentrifugasi tabung kosong pada kecepatan sentrifugasi yang ditunjukkan untuk operasi, tingkatkan waktu operasi sentrifugasi tabung kosong menjadi 2 menit jika masih ada residu etanol, atau biarkan pada suhu kamar selama 5 menit setelah sentrifugasi tabung kosong untuk memaksimalkan penghilangan residu etanol.

Isolasi jenis sampel asam nukleat

Kit Isolasi RNA Foregene dapat memperoleh isolasi/ekstraksi RNA total dari sumber sampel berikut: Jaringan hewan, tanaman, sel, virus, darah, dll.

Bagaimana cara menyimpan kit

Penyimpanan suhu ruang selama 24 bulan.