Tips untuk Meningkatkan Pemulihan Lem

1. Tingkatkan beban sampel selama elektroforesis.

2. Gunakan buffer elektroforesis yang baru disiapkan.

3. Saat memotong lem, cobalah untuk memotong hanya lem dengan strip untuk mengurangi volume pemotongan lem: tidak perlu lem dengan sedikit pecahan tujuan, jika tidak maka akan mempengaruhi tingkat pemulihan.

4. Setelah melelehkan dua atau lebih lem, gunakan tabung tidak peduli seberapa besar volumenya dan pindahkan ke kolom yang sama.

5. Larutan yang ditambahkan dalam sol bisa sedikit lebih banyak, yang lebih kondusif untuk pengikatan DNA ke membran, tetapi umumnya tidak melebihi 750ul.

6. Kunci pemulihan gel adalah mengikat DNA ke kolom melalui konsentrasi garam, keasaman (muatan) dan hidrofobisitas larutan dalam kolom.Oleh karena itu, jika pH buffer elektroforesis terlalu tinggi, 10ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) dapat ditambahkan ke sol;untuk mencegat molekul DNA pada membran dengan lebih baik, 30% isopropanol dapat ditambahkan ke panas ke dalam cairan setelah melarutkan lem.

7. Sebelum menambahkan eluen, biarkan kolom pada suhu kamar selama beberapa menit (sekitar 10 menit) untuk menguapkan etanol sepenuhnya.

8. Terakhir, tambahkan sedikit eluen untuk meminimalkan volume pemulihan.Umumnya, eluen 30-50μl digunakan untuk elusi (tidak terlalu sedikit, jika tidak maka tidak akan dapat membasahi membran, yang tidak kondusif untuk elusi);tetesan elusi berada di tengah membran, untuk sepenuhnya mengelusi DNA yang terikat pada membran.

9. Setelah menambahkan eluen, dapat dielusi dalam penangas air 55 derajat selama 5 menit atau ditempatkan dalam penangas air 50 derajat selama lebih dari 10 menit, atau ditutup dengan parafilm pada suhu 4 derajat semalam, dan kemudian disentrifugasi untuk pemulihan keesokan harinya, efeknya bagus.

10.Tambahkan eluat yang disentrifugasi kembali ke kolom adsorpsi dan sentrifus lagi.

Metode dan prosedur terperinci untuk pemulihan produk PCR

1. Daur ulang karet biasa

Jika Anda ingin memulihkan lem, yang terbaik adalah menggunakan kit yang nyaman dan memiliki tingkat pemulihan yang sedikit lebih tinggi.Jika Anda benar-benar perlu memulihkannya secara manual, Anda dapat menambahkan 3 kali volume TE setelah memotong lem.Setelah meleleh dalam penangas air, fenol, fenol/kloroform diekstraksi dengan bersih, dan etanol diendapkan.Itu dia.

2. Pemulihan DNA dari gel titik leleh rendah

Pemurnian Fragmen DNA Tambahkan TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0,1 mmol/l EDTA) sama dengan volume gel, dan tempatkan dalam penangas air 65°C selama 5 menit untuk melarutkan gel sepenuhnya.

Setelah dibawa ke suhu kamar, fenol dalam jumlah yang sama (jenuh dengan TE, TE disegel di lapisan atas, dan lapisan bawah fenol dihilangkan) ditambahkan, dan campuran dicampur dengan lembut (tidak diperlukan pencampuran), dan disentrifugasi pada 12.000 rpm selama 3 menit.Ulangi 1-2 kali.

Ambil supernatan, tambahkan 0,1 volume 3 mol/L natrium asetat (pH 5,2) dan 2,5 kali volume etanol absolut untuk melakukan presipitasi etanol.Larutkan DNA yang dimurnikan dengan jumlah TE yang sesuai, ukur isinya, dan siapkan untuk digunakan (dapat digunakan untuk analisis struktur gen target, persiapan probe, dll.).

3. Pemulihan PCR dengan spesifisitas amplifikasi yang baik

Jika spesifisitas amplifikasi PCR bagus, itu hanya pemurnian dan pemulihan sederhana dari produk PCR.Anda dapat menambahkan 50ug/ml proteinase K ke produk PCR, 37 derajat selama 1 jam, ekstrak sekali dengan fenol/kloroform, ekstrak sekali dengan kloroform, dan tambahkan 0,1 volume supernatan.Natrium asetat diperoleh kembali dengan presipitasi dengan 2,5 volume etanol absolut.

Produk-produk terkait:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/