Metode PCR dan kontaminasi aerosol asam nukleat di laboratorium pengujian asam nukleat ibarat dua sisi mata uang.Kita hanya bisa memilih untuk memilikinya atau tidak, tapi kita tidak bisa memilih apakah kita menginginkannya atau membelanjakannya.

1. Skrining penghilang DNA

Untuk mencapai penghilangan kontaminasi aerosol asam nukleat secara spasial, pertama-tama perlu untuk menyaring penghilang DNA yang dapat menghilangkan asam nukleat dalam keadaan cair.Karena tidak banyak penghilang DNA yang benar-benar berfungsi.Untuk metode eksperimental, silakan merujuk ke: Penghilang DNA tidak boleh menjadi "sudut rahasia" laboratorium!

Dalam percobaan ini, 100 salinan/μL (CT sekitar 31) plasmid ASFV dan penghapus DNA yang dikuantifikasi dengan PCR digital dicampur dalam volume yang sama, dan kemudian direaksikan pada suhu kamar masing-masing selama 10 menit, 20 menit, dan 30 menit.Setelah ekstraksi asam nukleat, amplifikasi qPCR dilakukan.Kontrol positif yang dicampur dengan plasmid dan air dibandingkan.Karena percobaan tidak selesai pada waktu yang sama, mungkin ada penyimpangan tertentu antara hasil, tetapi tidak mempengaruhi kesimpulan percobaan.Sejauh ini, saya telah mengevaluasi 10 produk penghilang DNA komersial.Hanya produk No. 1, No. 6 dan No. 8 yang dapat secara efektif mendegradasi DNA plasmid dalam keadaan cair.Produk lain hampir tidak berpengaruh.

Tabel 1 Efek penghilangan asam nukleat dari penghilang DNA yang tersedia secara komersial

2. Eksperimen efek penghilangan DNA dari disinfektan yang biasa digunakan

1. Skrining disinfektan yang biasa digunakan

Ada banyak jenis desinfektan yang biasa digunakan di laboratorium: aldehida, fenol, alkohol, garam amonium kuaterner, peroksida, preparat klorin, serta asam dan basa.Efek disinfeksi dari disinfektan ini terhadap mikroorganisme telah diverifikasi sepenuhnya oleh eksperimen, tetapi tidak ada data eksperimen yang memadai tentang efek degradasi asam nukleat.Laboratorium pengujian asam nukleat membutuhkan disinfektan yang tidak hanya memiliki efek disinfeksi yang baik terhadap mikroorganisme, tetapi juga dapat mendegradasi DNA.Hasil pengujian menunjukkan bahwa hanya dua sediaan klorin dari 84 disinfektan dan asam trikloroisosianurat dan asam klorida 1 M yang memenuhi persyaratan.Karena asam hidroklorat 1 M sangat korosif, preparat klorin direkomendasikan untuk digunakan sebagai pembuangan limbah di laboratorium pengujian asam nukleat.Namun, preparat klorin bersifat korosif terhadap logam dan tidak dapat digunakan untuk desinfeksi instrumen dan peralatan.

Tabel 2 Efek penghilangan DNA dari berbagai jenis desinfektan

2. Konsentrasi efektif minimum sediaan klorin

Disinfektan berbahan dasar klorin memiliki efek degradasi DNA yang kuat, tetapi karena sifat korosif dan iritasi logamnya, bahan ini dapat digunakan untuk membersihkan lantai, permukaan meja nonlogam, ujung perendaman, tabung sentrifus, dan benda uji lainnya.

Menurut "Panduan Teknis Disinfeksi Epidemi Pneumonia Koroner Baru": Polutan (darah, sekresi dan muntahan pasien) tersedia klorin 5g/L-10g/L disinfektan yang mengandung klorin;lantai, dinding, dan permukaan benda menggunakan klorin 1g/L Disinfektan klorin yang tersedia: pakaian, seprai, dan tekstil lainnya terlebih dahulu direndam dalam disinfektan klorin dengan klorin 0,5g/L yang tersedia selama 30 menit, lalu dibersihkan seperti biasa.

Tabel 3 Efek penghilangan DNA dari berbagai konsentrasi disinfektan klorin

Hasil pengujian menunjukkan bahwa: ketika konsentrasi klorin efektif lebih besar atau sama dengan 1,2 g/L, desinfektan yang mengandung klorin dapat mendegradasi sempurna 100 salinan/µL plasmid ketika digunakan selama 5 menit.Ketika beraksi selama 10 menit, 84 disinfektan dengan konsentrasi klorin efektif lebih besar dari atau sama dengan 0,6 g/L dapat sepenuhnya menurunkan 100 salinan/μL plasmid.

3. Eksperimen penghilangan udara yang tercemar oleh aerosol asam nukleat

Bagaimana cara membersihkan udara yang tercemar aerosol asam nukleat?Sebagian besar pemikiran adalah menciptakan lingkungan yang terkontaminasi aerosol dan kemudian membersihkannya, atau membersihkan asam nukleat setelah kontaminasi.Bagi saya, percobaan yang tidak dapat diulang dan hasil percobaan tidak dapat dianalisis secara kuantitatif tidak ada artinya, jadi saya meminjam beberapa metode desinfeksi udara disinfektan.Lihat "Persyaratan Umum GB27948-2020 untuk Disinfektan Udara" dan "Spesifikasi Teknis Disinfeksi"

1. Bahan uji

1.1 Penghilang DNA: Dalam percobaan ini, dua penghilang DNA yang tersedia secara komersial 6 dan 8 pada Tabel 1 dipilih.

1.2 Uji plasmid: Mempertimbangkan bahwa nilai CT dari sebagian besar polusi laboratorium akan lebih tinggi dari 30, konsentrasi plasmid gen ASFV yang digunakan kali ini adalah sekitar 100 salinan/μL, dan PCR CT kuantitatif fluoresen sekitar 31,07.Tambahkan plasmid ke swab kapas dan udara kering.

1.3 Instrumen uji: Instrumen desinfeksi Bilingkehan KVBOX, yang didukung oleh Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., memiliki kinerja desinfeksi udara yang sangat baik dengan disinfektan hidrogen peroksida, dan dapat secara efektif membunuh spora dan mikroorganisme lainnya.

1.4 Ruang uji: jendela transfer tertutup sekitar 0,1 meter kubik.

2. Metode pengujian

Jumlah set disinfektan pada mesin desinfeksi adalah 10ml, dan konsentrasinya 100ml/m3, yang jauh lebih tinggi dari "GB27948-2020 Persyaratan Umum untuk Disinfektan Udara": saat menggunakan desinfeksi semprotan aerosol, jumlah disinfektan harus ≤10 ml/m3