Pengujian laboratorium dimulai dengan pengambilan sampel, dan pengambilan sampel adalah yang paling mudah diabaikan.Hal terpenting untuk pengumpulan sampel adalah memilih jenis sampel yang benar, menggunakan alat pengambilan sampel yang sesuai, dan melakukan transportasi dan pemrosesan yang wajar.

I. Jenis sampel

Jenis sampel umum adalah sebagai berikut:

Metode pengambilan sampel dapat mengacu pada spesifikasi teknis untuk pemantauan lingkungan dari virus corona baru di pasar perdagangan (bazaar) pertanian”:

1. Usap sampel dari usap tenggorokan, tangan, pakaian, dan benda lain dari praktisi: diharuskan menggunakan larutan pengawet virus dalam tabung pengambilan sampel virus dan menyusup sepenuhnya ke dalam kapas pengambilan sampel.Permukaan tanah) berulang kali dioleskan dan dibilas lebih dari 3 kali.Pada saat yang sama, perlu dilakukan pengambilan sampel terdistribusi multi-titik pada permukaan objek sampel.

2. Sampel swab permukaan makanan: Sampel makanan tidak dapat diambil secara langsung.Makanan yang akan dikumpulkan harus dipisahkan dengan hati-hati dan disimpan dalam kantong pengambilan sampel yang bersih sebelum mengambil sampel swab.Diperlukan untuk menggunakan larutan pengawet virus dalam tabung pengambilan sampel virus, setelah benar-benar merendam kapas pengambilan sampel, berulang kali mengolesi dan membilas permukaan sampel makanan yang akan dikumpulkan lebih dari 3 kali.Pada saat yang sama, perlu dilakukan pengambilan sampel terdistribusi multi-titik pada permukaan sampel.

3. Sampel limbah: Menurut distribusi sistem drainase di pasar, pilih 2-3 lokasi pengambilan sampel limbah, dengan fokus pada pengumpulan jaringan pipa internal, arah aliran air hilir, atau sambungan dengan jaringan pipa kota.Untuk mengumpulkan sampel swab, rendam dalam limbah dengan kapas sampel untuk membuatnya menyerap limbah dan membilasnya di tabung sampel lebih dari 3 kali.Untuk mengumpulkan sampel air limbah, gunakan botol plastik polietilen untuk mengumpulkan 30-500 mL sampel air limbah;untuk pengumpulan limbah dengan volume lebih besar dari 500 mL, ember plastik polietilen atau peralatan pengayaan khusus sampel air di lokasi dapat digunakan.Pada saat yang sama, perlu dilakukan pengambilan sampel terdistribusi multi-titik untuk lokasi pengambilan sampel air limbah.

4. Sampel hewan: Untuk hewan hidup, sampel swab dapat digunakan untuk mengumpulkan swab permukaan tubuh, swab orofaringeal dan swab anal, dan sampel kotoran atau sekresi juga dapat dikumpulkan dan dicatat sesuai pada lembar catatan.Untuk sampel hewan yang telah dikuliti, dll., gunakan penyeka kapas untuk mengumpulkan sampel penyeka permukaan tubuh dan rongga tubuh.Diperlukan untuk menggunakan larutan pengawet virus dalam tabung pengambilan sampel virus untuk menyusup sepenuhnya ke kapas pengambilan sampel, dan kemudian mengulangi penerapan permukaan sampel makanan yang akan dikumpulkan.Shabu lebih dari 3 kali.Pada saat yang sama, perlu dilakukan pengambilan sampel terdistribusi multi-titik pada permukaan sampel.

5. Peralatan lainnya: wadah untuk mengangkut dan memelihara hewan seperti keramba atau tangki ikan.Pertama, amati atau pahami jenis hewan tertentu yang disimpan dan dibiakkan di dalam wadah, dan kumpulkan sampel swab di dinding bagian dalam wadah atau sampel cairan isinya.

6.Kumpulkan sampel aerosol di area tempat orang berkumpul, area perdagangan lokal yang berventilasi buruk, kantor, dan kamar kecil.

Alat II.Sampling
1. Tabung pengumpul darah
Jika Anda perlu melakukan pengujian asam nukleat dan sampel antikoagulan nanti, disarankan untuk menggunakan pembuluh darah vakum yang mengandung antikoagulan EDTA untuk mengumpulkan darah;untuk sampel serum, dianjurkan untuk menggunakan pembuluh darah vakum tanpa antikoagulan.

2. Pengambilan sampel swab

Disarankan untuk menggunakan penyeka polipropilen daripada penyeka kalsium alginat atau penyeka dengan tiang kayu, karena dapat mengandung zat yang menonaktifkan virus tertentu dan menghambat pengujian PCR.Penyeka dengan kepala kapas tidak dapat digunakan, karena serat kapas memiliki daya serap protein yang kuat dan tidak mudah terelusi ke dalam larutan pengawet selanjutnya.

Dalam “Spesifikasi Teknis untuk 10-in-1 Mixed Collection and Detection of New Coronavirus Nucleic Acids”, dengan jelas ditetapkan bahwa “sampel sampel harus terbuat dari poliester, nilon, dan bahan alginat non-kapas dan non-kalsium lainnya, dan pegangannya harus terbuat dari bahan bukan kayu.Titik putusnya sekitar 3 cm dari bagian atas kepala penyeka, yang mudah dipatahkan.”

CDC di Amerika Serikat juga menyebutkan “Gunakan hanya penyeka serat sintetis dengan poros plastik atau kawat.Jangan gunakan penyeka kalsium alginat atau penyeka dengan batang kayu,karena mungkin mengandung zat yang menonaktifkan beberapa virus dan menghambat pengujian PCR.

Saat ini banyak digunakan adalah swab berkelompok nilon steril sekali pakai yang dikombinasikan dengan batang plastik.Swab berkelompok memiliki tingkat penyerapan dan pelepasan air yang lebih baik.Menurut lokasi pengambilan sampel yang berbeda, kepala swab juga memiliki ukuran dan serat yang berbeda.Ketebalan.”

3. Contoh solusi pelestarian transportasi

Larutan pelestarian inaktivasi virus: konsentrasi garam guanidin dalam jumlah yang sesuai dan berbagai komponen lisis virus dapat langsung melisiskan virus untuk melepaskan asam nukleat, menonaktifkan RNase dan DNase, dan memastikan integritas asam nukleat, yang dapat digunakan untuk deteksi qPCR selanjutnya.Itu tidak dapat digunakan untuk budidaya dan isolasi virus.

Larutan transportasi dan pengawetan virus: mengandung garam, asam amino, vitamin, glukosa dan protein yang dibutuhkan untuk kelangsungan hidup virus, yang dapat menjaga aktivitas virus.Ini dapat digunakan untuk ekstraksi asam nukleat dan deteksi virus di masa mendatang, dan juga dapat digunakan untuk penanaman dan pemisahan virus.

4. Tabung pengawet sampel dan tas sampel

Tabung penyimpanan sampel harus berupa tabung plastik steril dengan tutup ulir yang tidak menyerap asam nukleat.Setiap tabung sampel harus ditutup dengan kantong sampel untuk mencegah kebocoran dan kontaminasi sampel.

AKU AKU AKU.Mengganggu zat dalam sampel

Zat pengganggu dalam percobaan PCR

1. gangguan endogen

Zat yang ada dalam sampel tubuh dapat mengganggu pendeteksian zat lain.

Darah:heme (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), trigliserida, IgG, dll.;

Air seni:Urea (20mM);

Bangku:polisakarida tumbuhan, kolat;

Jaringan:protease, kolagen;

susu: protease, ion kalsium;

Narkoba: antibiotik, obat antivirus, hormon, dll.

lainnya.

2. gangguan eksogen

Itu berasal dari zat yang dapat mengganggu deteksi zat lain secara in vitro.Aditif sampel dan zat yang dapat dihubungi selama pengumpulan dan pemrosesan sampel:

Alat uji: gel pemisahan serum, wadah pengumpul sampel dan sumbat karet, kateter, cairan pembilas kateter, bedak sarung tangan, dll.

Antikoagulan: heparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), dll.;

Pelarut organik: isopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil sulfoksida, formamida, gliserin, PEG, dll.;

Disinfektan: alkohol (etanol>1%), aldehida, fenol (fenol>0,2%), peroksida, asam kuat (HCL), alkali kuat (NaOH), dll.;

Deterjen:SDS (>0,005%);

Tanah: Humus

Zat warna: nila

lainnya.

Dalam kondisi pengambilan sampel luar ruangan yang sebenarnya, seperti mengumpulkan sampel lingkungan, sampel mungkin mengandung berbagai zat pengganggu, dan komposisi zat pengganggu di setiap lokasi berbeda, yang mengharuskan percobaan interferensi PCR dilakukan sesuai dengan kondisi setempat.

IV.Kondisi penyimpanan dan transportasi sampel

Spesimen klinis yang baru dikumpulkan harus dikirim ke laboratorium dalam waktu 2 hingga 4 jam setelah pengambilan pada suhu 2°C hingga 8°C.Simpan pada suhu 4℃ dalam waktu 24 jam.Spesimen yang digunakan untuk isolasi virus dan deteksi asam nukleat harus diuji sesegera mungkin.Spesimen yang dapat diuji dalam 24 jam dapat disimpan pada suhu 4°C;spesimen yang tidak dapat dideteksi dalam waktu 24 jam harus disimpan pada suhu -70°C atau lebih rendah (jika tidak- Simpan pada suhu 70°C dalam lemari es pada suhu -20°C).

Ringkasan:Pengumpulan, pengangkutan, dan penyimpanan sampel yang terstandardisasi sangat penting untuk pengujian selanjutnya.Negatif palsu dari banyak tes laboratorium disebabkan oleh pengumpulan, transportasi, dan penyimpanan sampel yang tidak tepat yang menyebabkan degradasi asam nukleat virus.Namun, banyak laboratorium yang masih mengabaikan pentingnya pengambilan sampel.Saya harap artikel ini dapat membangkitkan perhatian semua orang pada pengambilan sampel dan membuat pengambilan sampel yang lebih ilmiah dan masuk akal!

Produk terkait:

SARS-CoV-2 Varian Kit Deteksi Asam Nukleat (I) (Metode Probe Fluorescent PCR Multiplex)-Untuk Deteksi Mutan Dari Brasil, Afrika Selatan, dan Inggris