Berapa banyak yang Anda tahu

Tentang Nekstraksi asam ukleat

Awal dan akhir asam nukleat murni

Semuanya sulit pada awalnya, asam nukleat murni adalah yang paling banyak

Inisiasi percobaan molekuler, untuk percobaan selanjutnya

Keberhasilan atau kegagalan memiliki dampak penting.

Trace/ultra-trace UV spectrophotometer disukai oleh banyak peneliti ilmiah karena dapat mendeteksi konsentrasi asam nukleat dan residu ion protein dan garam secara sederhana, cepat dan ekonomis.

Seperti yang kita semua tahu, A260 berarti nilai OD serapan asam nukleat, A280 berarti nilai OD serapan konsentrasi protein, A230 berarti nilai OD serapan konsentrasi ion garam, jadi A260 dapat mengubah konsentrasi asam nukleat, A260/280 berarti residu protein, A260/230 berarti residu ion garam, tetapi ini hanya aturan yang ditemukan oleh para peneliti berdasarkan sejumlah besar hasil pengukuran, dan itu adalah "konvensional” untuk percaya bahwa itu dapat menjelaskan kemurnian DNA dan RNAbatas tertentu.Ini bukan satu-satunya standar untuk identifikasi hasil dan kemurnian asam nukleat, ini hanya digunakan sebagai referensi, dan bukan "standar emas".

Manual Thermo Fisher ND-2000 menekankan keandalan hasil pengujian

Pasalnya, hasil yang diperoleh dengan menggunakan spektrofotometer mikro/ultramikro UV hanya mencerminkan rendemen dan kemurnian asam nukleat dari samping, dan banyak faktor yang mempengaruhi (jalur optik, volume sampel, konsentrasi sampel, nilai pH, ion lain yang mempengaruhi pengukuran absorbansi, dll), nilai OD yang terukur belum tentu akurat.Pada saat yang sama, karena kurangnya spesifisitas bahan penentuan nilai absorbansi, DNA beruntai tunggal, DNA beruntai ganda, RNA, dNTP, dan beberapa protein semuanya memiliki puncak serapan pada panjang gelombang 260nm, dan konsentrasi yang ditentukan oleh A260 saja belum tentu DNA atau RNA asli.Konsentrasi, dan integritas serta degradasinya tidak dapat dinilai.

Jadi bagaimana menilai kualitas asam nukleat murni kita?Selain menggunakan spektrofotometer UV mikro/ultramikro untuk deteksi, metode seperti elektroforesis gel agarosa juga diperlukan untuk menampilkan kemurnian dan integritas asam nukleat secara visual, dan untuk menunjukkan konsentrasi sampai batas tertentu.Dengan cara ini, hasil dan kemurnian asam nukleat yang diperoleh dari hasil deteksi berbagai metode dapat dipercaya.

Perbandingan grafik eksperimental

DNA genom sel H1299 diekstraksi menggunakan kit Ekstraksi DNA perusahaan A, dan terlihat kontaminasi pengotor yang signifikan, menghasilkan nilai OD yang tinggi

(Nilai pengukuran OD dan elektropherogram yang sesuai)

indeks evaluasi

Apakah ada "standar emas" untuk pengujian hasil dan kualitas asam nukleat?

Sejauh yang kami tahu, tidak ada metode yang sederhana, cepat dan murah.Apakah itu spektrofotometer, elektroforesis gel, atau spektrometri massa, semuanya mencerminkan konsentrasi dan kemurnian asam nukleat dalam larutan dari aspek yang berbeda, dan perlu dinilai dengan merujuk satu sama lain.

Indeks evaluasi terbaik selaluaplikasi percobaan tindak lanjut.Itu tidak mempengaruhi efisiensi transkripsi balik dan amplifikasi PCR.Mendapatkan produk amplifikasi yang andal dan nilai Ct, dan mendapatkan urutan lengkap dengan pengurutan adalah ekstraksi asam nukleat yang berhasil.

Singkatnya, pandangan teori rasio saja harus ditentang oleh pandangan "menggunakan hasil eksperimen hilir yang baik sebagai parameter ekstraksi yang baik"!

Kit ekstraksi RNA DNA Foregene yang direkomendasikan untuk mendapatkan kemurnian DNA/RNA yang tinggi:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/