Menetapkan SOP percobaan PCR untuk menstandarkan perilaku petugas percobaan.
Eksperimen secara ketat mematuhi prosedur operasi, dan meminimalkan polusi PCR yang mungkin disebabkan oleh faktor manusia atau mencegah terjadinya polusi.Selain itu, pelaku eksperimen harus memiliki pengetahuan dan keterampilan profesional yang sesuai, termasuk kemahiran dalam mengoperasikan peralatan terkait, mengklarifikasi seluruh proses kerja, menguasai metode pengolahan kontaminasi dan metode kontrol kualitas laboratorium, serta mampu menginterpretasikan hasil pengujian dengan benar.
Mendirikan laboratorium PCR standar.
Laboratorium PCR pada prinsipnya dibagi menjadi empat area, yaitu area persiapan reagen, area pemrosesan sampel, area amplifikasi, dan area analisis produk amplifikasi.Dua area pertama adalah area pra-amplifikasi, dan dua area terakhir adalah area pasca-amplifikasi.Zona pra-amplifikasi dan zona pasca-amplifikasi harus dipisahkan secara ketat.Bahan percobaan, reagen, kertas perekam, pena, bahan pembersih, dll., Hanya dapat mengalir dari area pra-amplifikasi ke area pasca-amplifikasi, yaitu dari area persiapan reagen → area pemrosesan sampel → area amplifikasi → area analisis produk amplifikasi, dan tidak boleh mengalir mundur.Aliran udara di laboratorium juga harus mengalir dari area pra-amplifikasi ke area pasca-amplifikasi, dan tidak mengalir mundur.Desain laboratorium PCR yang ideal ditunjukkan di bawah ini:
Gambar A: Mode pengaturan laboratorium PCR yang ideal dengan tekanan negatif di ruang penyangga
Gambar B: Mode pengaturan laboratorium PCR yang ideal dengan tekanan positif di ruang penyangga
Diagram pengaturan laboratorium PCR yang diberikan pada Gambar A dan Gambar B harus menjadi mode pengaturan yang lebih ideal, dan laboratorium dengan kondisi dapat merujuk ke mode ini untuk desain.Untuk laboratorium biasa, disarankan agar area amplifikasi PCR dan area analisis produk dapat dipisahkan, dan pembukaan penutup harus dikurangi sebanyak mungkin di area preparasi sampel dan area amplifikasi PCR.Ingat: Produk dan perlengkapan eksperimen di area analisis produk dilarang keras dibawa ke area persiapan sampel dan area amplifikasi PCR.
Jika laboratorium hanya melakukan deteksi dan identifikasi PCR, disarankan untuk menggunakan PCR kuantitatif fluoresen daripada PCR konvensional.
Hasil deteksi PCR kuantitatif fluoresensi dapat dikumpulkan dan dianalisis dengan sinyal fluoresensi, sehingga tidak perlu membuka tutup untuk elektroforesis setelah reaksi, yang menghindari kontaminasi produk PCR yang disebabkan oleh kebocoran produk reaksi untuk membentuk aerosol.Jika Anda menambah jumlah bukaan tutup selama langkah pemuatan elektroforesis gel, kemungkinan akan terjadi kontaminasi aerosol.Direkomendasikan untuk mempromosikan penerapan PCR kuantitatif dan mengganti PCR kualitatif secara bertahap.
Sistem kontaminasi produk anti-PCR UNG digunakan untuk reaksi PCR.
Sistem menggunakan dUTP, bukan dTTP.Setelah reaksi PCR, semua produk PCR (fragmen DNA) digabungkan dengan dUTP;pada putaran reaksi PCR selanjutnya, enzim UNG yang ditambahkan ke dalam sistem diinkubasi pada suhu 37°C selama 5 menit sebelum PCR, yang secara khusus dapat mendegradasi semua fragmen DNA yang mengandung dUTP, kemudian dilakukan reaksi PCR.Ini benar-benar dapat menghilangkan kontaminasi aerosol yang disebabkan oleh produk PCR.Efeknya ditunjukkan pada gambar di bawah ini:
Catatan: Untuk seri PCR langsung, Anda dapat memilih produk seri sistem kontaminasi produk anti-PCR dari ForegeneMenyarankan
Untuk laboratorium yang melakukan pengujian genotipe skala besar, sangat disarankan untuk menggunakan sistem kontaminasi produk anti-PCR UNG untuk pengujian reagen selain pembangunan laboratorium yang wajar.
Peringatan: Penggunaan sistem ini tidak dapat menghilangkan kontaminasi produk PCR yang telah ditimbulkan.Oleh karena itu, sistem UNG harus digunakan pada awal pengujian yang relevan, dan sistem UNG harus digunakan untuk amplifikasi PCR, untuk mencegah kontaminasi produk PCR Positif palsu.
Disarankan untuk menggunakan sistem Direct PCR-UNG dari Foregene saat melakukan pengujian skala besar, seperti:
Kit PCR Langsung Daun Tanaman-UNG ；
Kit PCR Langsung Benih Tanaman-UNG；
Kit PCR Langsung Jaringan Hewan-UNG ；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。
Seri kit ini dari Foregenetidak hanya dapat melakukan deteksi PCR dengan cepat dan dalam skala besar, tetapi juga secara efektif mencegah dan mengendalikan kontaminasi produk PCR.
Waktu posting: Mar-19-2021
