Fitur luar biasa dari reaksi PCR adalah kapasitas amplifikasi yang besar dan sensitivitas yang sangat tinggi.Untuk meningkatkan kinerja PCR dan efisiensi pendeteksian, kami berkomitmen untuk meningkatkan kapasitas amplifikasi PCR dan sensitivitas pendeteksian, tetapi sakit kepala sedang dalam proses percobaan.Positif palsu sering terjadi, dan sejumlah kecil kontaminasi silang sampel atau kontaminasi produk PCR dapat menyebabkan positif palsu dalam percobaan.
Lima jenis kontaminasi produk PCR
Ada banyak alasan kontaminasi PCR, yang secara kasar dapat dibagi ke dalam kategori berikut:
Kontaminasi spesimen terutama disebabkan oleh kontaminasi wadah untuk mengumpulkan spesimen, atau ketika spesimen ditempatkan, bocor keluar dari wadah karena penyegelan yang longgar, atau spesimen menempel di bagian luar wadah, yang menyebabkan kontaminasi silang;Kontaminasi menyebabkan kontaminasi antar spesimen;beberapa spesimen mikroba, terutama virus, dapat menyebar dengan aerosol atau membentuk aerosol, sehingga saling mengkontaminasi.
Alasan utamanya adalah selama persiapan reagen PCR, pistol sampel, wadah, air suling ganda, dan larutan lain terkontaminasi oleh templat asam nukleat PCR.
Di laboratorium biologi molekuler dan beberapa laboratorium yang menggunakan kloning plasmid sebagai kontrol positif, masalah kontaminasi plasmid hasil kloning juga sering terjadi.Karena kandungan plasmid kloning dalam volume satuan cukup tinggi, dan lebih banyak alat dan reagen diperlukan dalam proses pemurnian, dan plasmid dalam sel hidup sangat mungkin terkontaminasi karena kemampuan pertumbuhan dan reproduksi sel hidup yang kuat.
Kontaminasi produk amplifikasi adalah masalah kontaminasi yang paling umum dalam reaksi PCR.Karena jumlah salinan produk PCR besar (umumnya 1013 salinan/ml), yang jauh lebih tinggi dari batas jumlah salinan deteksi PCR, kontaminasi produk PCR dalam jumlah yang sangat kecil dapat menyebabkan positif palsu.
Polusi aerosol adalah bentuk kontaminasi produk PCR yang paling mungkin, dan juga paling mudah untuk diabaikan.Itu terbentuk oleh gesekan antara permukaan cairan dan udara.Umumnya, kontaminasi aerosol dapat terbentuk saat tutup dibuka, saat sampel disedot, atau bahkan saat tabung reaksi dikocok dengan kuat.Menurut perhitungan, partikel aerosol dapat mengandung 48.000 eksemplar, sehingga polusi yang ditimbulkannya merupakan masalah yang perlu mendapat perhatian khusus.
Secara khusus, laboratorium pengujian sering menggunakan pasangan primer yang sama untuk menguji gen tertentu.Seiring waktu, kontaminasi produk PCR dalam jumlah besar akan terjadi di ruang laboratorium.Begitu kontaminasi semacam itu terjadi, sulit untuk menghilangkannya dalam waktu singkat.
Untuk tiga jenis polusi yang pertama, kita dapat menggunakan cara yang efektif untuk menghindarinya, tetapi polusi yang disebabkan oleh produk PCR sulit dicegah, terutama dalam pembangunan laboratorium PCR yang tidak standar.Pada proses PCR, ketika ujung pipet menghisap dan meniupkan cairan, dan penutup tabung PCR dibuka, maka akan terbentuk aerosol.Molekul DNA yang dibawa oleh aerosol (satu aerosol dapat membawa puluhan ribu DNA) sulit dihilangkan karena melayang di udara.Setelah putaran percobaan PCR berikutnya diperkenalkan, positif palsu pasti akan terjadi.
Seperti yang ditunjukkan pada gambar di bawah, kontrol negatif juga memperkuat pita minat yang sesuai:
Bagian pertama dari masalah polusi dan pencegahan PCR ini diperkenalkan di sini.Edisi berikutnya akan membawakan Anda bagian kedua "Pencegahan kontaminasi produk PCR", jadi pantau terus!
Waktu posting: Jul-25-2017
