Berikut analisis kemungkinan masalah padaBukalmengusap/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Kolom pemurnian tersumbat

Dalam kit ini, dalam operasi ekstraksi DNA genom, kolom pemurnian langsung diserap pada campuran lisis enzimatik sampel tanpa langkah sentrifugasi, dan kolom pemurnian dapat diblokir karena enzimisasi yang tidak lengkap dan viskositas sampel yang tinggi.

Kemungkinan penyebab berikut adalah sebagai berikut:

1. Pencernaan enzimatik sampel jaringan yang tidak lengkap.

Rekomendasi: Waktu pemrosesan sampel Foregene Protease dapat diperpanjang dengan tepat atau supernatan dapat diambil setelah sentrifugasi pada 12.000 rpm (~13.400× g) selama 5 menit.

2. Penggunaan sampel jaringan yang berlebihan atau jaringan yang besar.

Rekomendasi: Yang terbaik adalah tidak melebihi 1Bukal swab dalam sampel;jika sampel terlalu besar, tingkatkan dosis Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 yang sesuai.

3. Viskositas sampel terlalu tinggi.

Rekomendasi: Sampel dapat diencerkan dengan tepat dengan 10 mM Tris-HCl sebelum ekstraksi DNA genomik.

4. Pecahan kartu darah telah terhisap.

Rekomendasi: Waktu sentrifugasi sementara dari langkah 6 ekstraksi genom bercak darah (Kartu FTA) dapat diperpanjang dengan tepat.

Hasil rendah atau tidak ada DNA

Seringkali ada berbagai faktor yang mempengaruhi hasil DNA genom, termasuk asal sampel, kondisi penyimpanan sampel, persiapan sampel, manipulasi, dll.

DNA genom tidak dapat diperoleh selama ekstraksi

Kemungkinan penyebabnya adalah sebagai berikut:

1. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau penyimpanan yang terlalu lama menyebabkan degradasi DNA genomik.

Rekomendasi: Penyeka oral sebaiknya diambil sampelnya yang baru, dan tidak disarankan menggunakan penyeka yang diawetkan untuk operasi ekstraksi DNA genomik;sampel bercak darah harus memastikan bahwa kualitasnya memenuhi syarat dan waktu penyimpanan tidak boleh terlalu lama.

2. Penggunaan jaringan yang terlalu sedikit dapat mengakibatkan tidak adanya ekstraksi DNA genomik yang sesuai.

Rekomendasi: Ikutibuccal instruksi pengambilan sampel swab dalam panduan operasi, dan seka sebanyak mungkin sehingga cukup banyak sel yang dapat ditempelkan pada swab oral untuk ekstraksi DNA genomik;untuk ekstraksi sampel bercak darah, area pemotongan bercak darah dapat ditingkatkan dengan tepat.

3. Protease Foregene tidak diawetkan dengan benar, mengakibatkan penurunan aktivitas atau inaktivasinya.

Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan dariForegene Protease atau menggantinya dengan Foregene Protease baru untuk reaksi enzimatik.

4. Pengawetan kit yang tidak tepat atau waktu penyimpanan yang terlalu lama, mengakibatkan kegagalan beberapa komponen dalam kit.

Rekomendasi: Beli yang baruBukal usapkan DNAisolasi kit untuk prosedur terkait.

5. Buffer WB tidak menambahkan etanol absolut.

Rekomendasi: Konfirmasikan bahwa buffer WB menambahkan etanol absolut dengan volume yang tepat.

6. Eluen tidak ditambahkan dengan benar ke film silikon.

Rekomendasi: Tambahkan 65°Celuen yang telah dipanaskan sebelumnya turun ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk meningkatkan efisiensi elusi.

LDNA genom dengan aliran hasil terpencil

Kemungkinan penyebab berikut adalah sebagai berikut:

1. Pengawetan sampel yang tidak tepat atau penyimpanan yang terlalu lama menyebabkan degradasi DNA genomik.

Rekomendasi: Penyeka oral lebih disukai diambil sampelnya, dan penyeka yang diawetkan tidak boleh digunakan untuk ekstraksi DNA genomik.

2. Jika jumlah sampel jaringan terlalu sedikit, kandungan DNA genom yang diekstraksi akan lebih sedikit.

Rekomendasi: Ikuti petunjuk pengambilan sampel swab oral dalam panduan pengoperasian, seka sebanyak mungkin sehingga cukup banyak sel yang dapat ditempelkan pada swab oral untuk ekstraksi DNA genomik.

3. Protease Foregene tidak diawetkan dengan benar, mengakibatkan penurunan aktivitas atau inaktivasinya.

Rekomendasi: Pastikan kondisi penyimpanan darithe Foregene Protease atau ganti dengan yang baru Foregene Protease untuk reaksi enzimatik.

4. Masalah eluen.

Rekomendasi: Gunakan Buffer EB untuk elusi;jika menggunakan ddH₂O atau eluen lain, pastikan pH eluat antara 7,0-8,5.

5. Eluat tidak ditambahkan dengan benar tetes demi tetes.

Rekomendasi: Tambahkan tetesan eluen ke tengah membran silikon dan biarkan pada suhu kamar selama 5 menit untuk meningkatkan efisiensi elusi.

6. Cairan elusi menumpuk terlalu sedikit.

Rekomendasi: Gunakan eluen untuk elusi DNA genom seperti yang dipersyaratkan dalam instruksi, setidaknyatidak kurang dari 15μl.

Laduh kemurnian of DNA genomterpencil

Kemurnian DNA genomik yang rendah dapat menyebabkan kegagalan atau hasil percobaan hilir yang tidak memuaskan, seperti: enzim tidak dapat dipotong terbuka, PCR tidak dapat memperoleh fragmen gen yang diinginkan, dll.

Kemungkinan penyebabnya adalah sebagai berikut:

1. Polusi heteroprotein, polusi RNA.

Analisis: Kolom pemurnian tidak dicuci menggunakan Buffer PW;kolom pemurnian Buffer PW wash tidak dicuci menggunakan kecepatan sentrifugal yang benar.

Rekomendasi: Pastikan tidak ada pengendapan di supernatan sebelum menambahkan etanol;pastikan untuk mencuci kolom pemurnian sesuai petunjuk, dan langkah ini tidak dapat diabaikan.

2. Polusi ion pengotor.

Analisis: Pencucian buffer WB kolom pemurnian dihilangkan atau dicuci hanya satu kali, menghasilkan sisa kontaminasi ionik.

Rekomendasi: Pastikan untuk mencuci Buffer WB 2 kali sesuai petunjuk untuk menghilangkan sisa ion sebanyak mungkin.

3. Kontaminasi enzim RNA.

Analisis: RNases asing ditambahkan ke buffer;Operasi pencucian Buffer PW salah, menghasilkan residu RNase, memengaruhi operasi eksperimental RNA hilir, seperti transkripsi in vitro.

Rekomendasi: Asam nukleat deret foregeneisolakit tion dapat menghapus RNA tanpa penambahan tambahan RNase,dengan demikian Buccal Swab/Kartu FTA DNA Isolasi Kitmembutuhkan't tambahkan RNase;pastikan untuk mengikuti petunjuk untuk kolom pemurnian pencucian Buffer PW, dan langkah ini tidak dapat diabaikan.

4. Residu etanol.

Analisis: Buffer WB tidak melakukan sentrifugasi tabung kosong setelah kolom pemurnian dicuci.

Rekomendasi: Lakukan operasi sentrifugasi tabung kosong yang benar sesuai petunjuk.

5. Polusi pengotor lainnya.

Analisis: Sampel yang disimpan atau sampel khusus tidak diolah terlebih dahulu.

Rekomendasi: Pretreatment sampel secara menyeluruh seperti yang diinstruksikan.