Penulis: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unit: Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang Berafiliasi dengan Universitas Tongji

Saat ini, jenis sampel utama untuk deteksi asam nukleat patogen pernapasan adalah swab tenggorokan.Ada banyak jenis larutan pengawetan sampel yang biasa digunakan, semuanya perlu didinginkan atau dibekukan untuk pengangkutan dan penyimpanan;Sulit untuk mengontrol seluruh proses suhu rendah selama proses pengumpulan dan pengangkutan, dan sulit untuk memastikan kontrol kualitas sebelum pengujian sampel^[1-2].

RNase (RNase) adalah endonuklease yang menghidrolisis RNA, terutama memutuskan ikatan fosfodiester antara nukleotida.Molekul RNase sangat stabil, terdapat ikatan disulfida dalam strukturnya, dan aktivitasnya tidak memerlukan adanya kation divalen, sehingga RNase tidak mudah terdenaturasi, dan mudah untuk diubah sifatnya bahkan setelah suhu tinggi atau penggunaan denaturasi.RNases dibagi menjadi yang endogen dan eksogen.RNases endogen dapat dilepaskan pada saat yang sama ketika sel pecah.Oleh karena itu, menghilangkan peran RNase endogen merupakan langkah yang sangat penting dalam proses ekstraksi RNA.RNases eksogen didistribusikan secara luas.RNases ada di udara, kulit manusia, rambut dan air liur, yang merupakan alasan penting untuk degradasi RNA yang mudah^[3].

Kueri data

CANS-CL02-A009 “Penerapan Pedoman Akreditasi Kualitas dan Kompetensi Laboratorium Medis di Bidang Diagnosis Molekuler” dalam persyaratan teknis mengusulkan bahwa standar kualitas air yang sesuai harus dirumuskan sesuai dengan aplikasi;Wadah kedap udara sekali pakai:

RNase/Klasifikasi

(1) RNase A

Ribonuklease A (RNase A), berasal dari pankreas sapi, adalah endoribonuklease yang secara spesifik dapat menyerang ujung 3′ residu pirimidin pada RNA, memotong sitosin atau urasil yang dibentuk oleh nukleotida yang berdekatan.Ikatan fosfodiester, produk akhir dari reaksi adalah nukleotida pirimidin 3′ dan oligonukleotida dengan nukleotida pirimidin 3′ di ujungnya.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) berasal dari Aspergillus orjzae, secara khusus bekerja pada 3′-terminal fosfat guanin, dan situs pembelahan berada di antara 3′ fosfat guanin dan 5′ hidroksil nukleotida yang berdekatan.Produk akhir dari reaksi adalah asam 3′guanilat dan fragmen oligonukleotida dengan asam 3′guanilat di ujungnya.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) pertama kali ditemukan dari jaringan timus betis, dan gen penyandinya telah diklon ke Escherichia coli.Ini secara khusus dapat menurunkan DNA: Untai RNA dalam dupleks hibrida RNA, menghasilkan oligonukleotida dan mononukleotida dengan ujung 3′-OH dan 5′-monofosfat, ia tidak dapat menurunkan DNA atau RNA beruntai tunggal atau ganda.

RNase

Fungsi dan kegunaan

Ribonuclease dapat mengkatalisis degradasi asam ribonukleat (RNA) dan dapat disintesis secara artifisial.Salep obat digunakan secara topikal untuk mengobati trauma dan nyeri sendi.Menurut laporan, ribonuklease dapat mengubah metabolisme sel inang, menghambat sintesis virus, menghambat proliferasi virus influenza in vitro, dan menghambat pembentukan virus vaksinia dan herpes pada embrio ayam.Penggunaan klinis injeksi intramuskular ribonuklease harian 180 mg, bermanfaat untuk pengobatan ensefalitis epidemik, ribonuklease dapat mengkatalisasi degradasi asam ribonukleat (RNA), dan sekarang dapat disintesis secara artifisial.Salep obat digunakan secara topikal untuk mengobati trauma dan nyeri sendi.Menurut laporan, ribonuklease dapat mengubah metabolisme sel inang, menghambat sintesis virus, menghambat proliferasi virus influenza in vitro, dan menghambat pembentukan virus vaksinia dan herpes pada embrio ayam.Penggunaan klinis injeksi intramuskular ribonuklease harian 180 mg bermanfaat untuk pengobatan ensefalitis epidemik.

RNase

Definisi penghambat

Definisi unit penghambat RNase: Jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menghambat 50% aktivitas 5ng RNase A adalah satu unit.

Bagaimana Inhibitor RNase Bekerja

Guanidin isotiosianat:

Guanidine isothiocyanate adalah senyawa organik dengan rumus molekul C2H6N4S.Terutama digunakan dalam pengobatan biologi, reagen kimia, dll. Guanidine isothiocyanate adalah agen pelisis protein, dan sering digunakan sebagai komponen utama larutan lisis dalam reagen diagnostik molekuler.Ini dapat melisiskan jaringan, menghancurkan struktur sel dan memisahkan asam nukleat dari nukleoprotein, dan memiliki denaturasi yang kuat terhadap RNase.Ini adalah penghambat RNase paling efektif saat ini.

TRIzol adalah reagen ekstraksi RNA total baru yang dapat langsung mengekstraksi total RNA dari sel atau jaringan.Ini mengandung zat seperti fenol dan guanidin isotiosianat, yang dapat dengan cepat mengganggu sel dan menghambat nuklease yang dilepaskan oleh sel.

(Namun, guanidine isothiocyanate berbahaya bagi kesehatan peneliti laboratorium.)

RNasin:

Glikoprotein asam diekstraksi dari hati tikus atau blastoderm manusia.Rnasin adalah inhibitor RNase non-kompetitif, yang dapat berikatan dengan berbagai RNase untuk menonaktifkannya.

(Lebih detail: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hsuhu tinggi:

Suhu tinggi juga merupakan cara umum denaturasi protein.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC adalah penghambat RNase yang kuat tetapi tidak lengkap, yang dapat menghambat aktivitas RNase dengan menggabungkan cincin imidazol asam amino dari gugus aktif RNase untuk mendenaturasi protein.

Kompleks vanadil ribonukleosida:

Kompleks yang dibentuk oleh ion vanadium oksida dan nukleosida, yang berikatan dengan RNase dalam bentuk zat transisi, yang hampir sepenuhnya dapat menghambat aktivitas RNase

lainnya:

SDS, urea, tanah diatom, dll. juga memiliki efek penghambatan tertentu pada RNase.

Ulasan Pakar

Kepala Teknisi Li Yujie

Direktur Departemen Laboratorium, Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang yang Berafiliasi dengan Universitas Tongji

Untuk mencegah biodegradasi RNase eksogen, masker, sarung tangan, dan topi harus sering dipakai dan diganti selama proses ekstraksi RNA.Semua barang pecah belah harus dipanggang dalam oven pengering pada suhu 200°C selama lebih dari 2 jam.Bahan yang digunakan untuk memanggang, seperti plastik, perlu diolah dengan air DEPC, lalu dicuci dengan air suling.Reagen atau perangkat yang digunakan untuk ekstraksi, pengawetan, dan identifikasi RNA harus didedikasikan untuk RNA, dan area operasi RNA independen harus disiapkan.

referensi:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, dkk.Bakteri dan virus di nasofaring segera sebelum timbulnya infeksi saluran pernapasan bawah akut pada anak-anak Pribumi Australia[J].Eur J Clin Microbiol Menginfeksi Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Cabang Pengendalian Infeksi Rumah Sakit dari Asosiasi Pengobatan Pencegahan Tiongkok.Pedoman pengumpulan dan pemeriksaan spesimen mikroba klinis [J].Jurnal Infeksi Rumah Sakit Cina, 2018(20):3192-3200.

[3] “Uji Klinis Sepuluh Ribu Mengapa Volume Uji Biologi Molekuler”