Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Kit qRT-PCR Satu Langkah Siap Sel
Deskripsi
Kit ini menggunakan sistem buffer lisis unik yang dapat dengan cepat melepaskan RNA dari sampel sel kultur untuk reaksi RT-qPCR, sehingga menghilangkan proses pemurnian RNA yang memakan waktu dan melelahkan.Template RNA dapat diperoleh hanya dalam 7 menit.5×Campuran RT langsung dan 2×Reagen qPCR Mix-SYBR langsung yang disediakan oleh kit dapat dengan cepat dan efektif memperoleh hasil PCR kuantitatif waktu nyata.
5×Campuran RT langsung dan 2×Direct qPCR Mix-SYBR memiliki toleransi inhibitor yang kuat, dan lisat sampel dapat digunakan sebagai template untuk RT-qPCR secara langsung.Kit ini berisi transkriptase balik Foregene dengan afinitas tinggi RNA yang unik, dan polimerase DNA D-Taq Panas, dNTP, MgCl2, penyangga reaksi, pengoptimal dan penstabil PCR.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponen kit
| Bagian I | Penyangga CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Penyangga ST | |
| Bagian II | Penghapus DNA |
| 5× Campuran RT Langsung | |
| 2× Langsung qPCR Mix-SYBR | |
| 50× Pewarna Referensi ROX | |
| ddH2O Bebas RNase | |
| Instruksi | |
Fitur & keuntungan
■Sederhana dan efektif : dengan teknologi Cell Direct RT, sampel RNA dapat diperoleh hanya dalam 7 menit.
■ Permintaan sampel kecil, serendah 10 sel dapat diuji.
■ Throughput tinggi: dapat dengan cepat mendeteksi RNA dalam sel yang dikultur dalam pelat 384, 96, 24, 12, 6 sumur.
■ Penghapus DNA dapat dengan cepat menghapus genom yang dilepaskan, sangat mengurangi dampak pada hasil eksperimen selanjutnya.
■ Sistem RT dan qPCR yang dioptimalkan menjadikan transkripsi balik RT-PCR dua langkah lebih efisien dan PCR lebih spesifik, serta lebih tahan terhadap penghambat reaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel berbudaya.
- RNA dirilis oleh lisis sampel: hanya berlaku untuk template RT-qPCR dari kit ini.
- Kit ini dapat digunakan untuk tujuan berikut: analisis ekspresi gen, verifikasi efek pembungkaman gen yang dimediasi siRNA, skrining obat, dll.
Diagram
Penyimpanan dan Umur simpan
Bagian I dari kit ini harus disimpan pada suhu 4℃;Bagian II harus disimpan pada -20 ℃.
Foregene Protease Plus II harus disimpan pada 4℃, jangan dibekukan pada -20℃.
Reagen 2×qPCR Mix-SYBR langsung harus disimpan di -20℃dalam gelap;jika sering digunakan, bisa juga disimpan di 4℃ untuk penyimpanan jangka pendek (habiskan dalam 10 hari).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer dan Reverse Primer
Untuk Real Time PCR, desain primer sangat penting.Primer terkait dengan spesifisitas dan efisiensi amplifikasi PCR, dan dapat dirancang dengan mengacu pada prinsip-prinsip berikut:
Panjang primer: 18-30bp.
Konten GC: 40-60%.
Nilai Tm: Perangkat lunak desain primer, seperti Primer 5, dapat memberikan nilai Tm dari primer.Nilai Tm primer upstream dan downstream harus sedekat mungkin.Rumus perhitungan Tm juga dapat digunakan: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Saat melakukan PCR, suhu di bawah nilai Tm primer 5 °C umumnya dipilih sebagai suhu anil (peningkatan suhu anil yang sesuai dapat meningkatkan spesifisitas reaksi PCR).
Produk primer dan PCR:
Panjang produk amplifikasi PCR desain primer sebaiknya 100-150bp.
Primer desain di area struktural sekunder dari template harus dihindari sebisa mungkin.
Hindari pembentukan 2 atau lebih basa komplementer antara ujung 3′ primer hulu dan hilir.
Basis terminal Primer 3′ tidak dapat hadir dengan 3 tambahan berturut-turut G atau C.
Primer itu sendiri tidak dapat memiliki struktur pelengkap, jika tidak, struktur jepit rambut akan terbentuk, yang memengaruhi amplifikasi PCR.
ATCG harus didistribusikan secara merata dalam urutan primer, dan basis terminal 3′ harus dihindari seperti T.
Lampiran 1：Paket suplemen komponen Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Solusi Lisis Sel
|
| |||
| Komponen kit (sistem lisis 24-sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| BagianSaya | Penyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Penyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Penghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2. Campuran RT
|
| |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Campuran RT Langsung | 800 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× Pewarna Referensi ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
