• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Memimpin

RNA non-coding yang panjang, lncRNA adalah RNA non-coding dengan panjang lebih dari 200 nukleotida, umumnya antara 200-100000 nt.lncRNA mengatur ekspresi gen pada tingkat epigenetik, transkripsi dan pasca-transkripsi, dan berpartisipasi dalam pembungkaman kromosom X, pencetakan genom dan modifikasi kromatin, aktivasi transkripsi, interferensi transkripsi, transpor nuklir, regulasi siklus sel, regulasi diferensiasi sel, dan efek kompensasi dosis (Efek kompensasi dosis) dan banyak proses regulasi penting lainnya terkait erat dengan terjadinya, perkembangan dan pencegahan penyakit manusia, dan saat ini menjadi salah satu hot spot di bidang biomedis.

01  Jenis dan karakteristik LncRNA

berita723 (1)

lncRNA dibagi menjadi banyak jenis sesuai dengan sumber pembentukannya yang berbeda, seperti yang ditunjukkan pada gambar di atas.Memiliki karakteristik sebagai berikut:

1. lncRNA biasanya lebih panjang, dengan ekspresi dinamis dan metode penyambungan yang berbeda selama diferensiasi
2. Dibandingkan dengan gen pengkode, lncRNA biasanya memiliki tingkat ekspresi yang lebih rendah
3. Sebagian besar lncRNA memiliki spesifisitas ekspresi temporal dan spasial yang jelas dalam proses diferensiasi dan perkembangan jaringan
4. Terdapat ekspresi karakteristik pada tumor dan penyakit lainnya
5. Lokasi subseluler lncRNA beragam
6. Urutannya rendah dalam kekekalan, tetapi fungsinya memiliki tingkat kekekalan tertentu, dll.

02 Pertanyaan yang Sering Diajukan tentang Transkripsi Terbalik LncRNA

Karena kandungan lncRNA yang rendah dalam sel, panjang panjang dan struktur tingkat tinggi, RNA tersebut sering memiliki struktur kompleks seperti loop batang atau jepit rambut, dan RT-qPCR rentan terhadap masalah transkripsi balik yang tidak berhasil atau efisiensi rendah.

03 Solusi transkripsi terbalik LncRNA

berita723 (2)

Dalam aturan sentral, proses virus RNA menggunakan transkriptase baliknya sendiri untuk mensintesis DNA menggunakan RNA sebagai templat disebut transkripsi balik.Proses penggunaan transkriptase balik virus RNA untuk mensintesis templat cDNA in vitro disebut transkripsi balik.Elemen utama yang termasuk dalam sistem transkripsi balik: templat RNA, transkriptase balik, primer, dan komponen lainnya.

1. Templat RNA

Pengaruh templat RNA pada transkripsi terbalik tercermin dalam struktur, kemurnian, dan integritasnya.Semakin tinggi kemurnian dan integritas RNA yang diekstraksi, semakin tinggi efisiensi transkripsi balik dan semakin akurat hasil kuantitatif berikutnya.RNA yang dimurnikan dengan reagen ekstraksi RNA yang umum digunakan sering mengandung residu alkohol dan garam guanidin, yang memiliki efek penghambatan yang kuat pada sebagian besar transkriptase balik.

2. Membalikkan transkriptase

Reverse transcriptase memiliki pengaruh utama di seluruh sistem transkripsi balik.Suhu yang cocok untuk reverse transcriptase yang digunakan di sebagian besar laboratorium umumnya adalah 42°C.Faktanya, pembukaan struktur RNA tingkat tinggi membutuhkan suhu yang lebih tinggi, dan persyaratan untuk reverse transcriptase lebih tinggi.

3.Primer

Primer transkripsi terbalik termasuk primer spesifik gen, primer acak, dan primer Oligo dT.Sebagian besar lncRNA tidak mengandung ekor poliA, dan penting untuk mencocokkan primer acak dengan Oligo dT dengan benar.

4. Komponen lainnya

Mengingat fakta bahwa RNA sangat mudah terdegradasi, pengenalan komponen dalam sistem transkripsi terbalik dapat diminimalkan, yang secara efektif dapat mencegah masuknya RNase dan memastikan kelancaran kemajuan transkripsi terbalik.

Foregenediperoleh dari template RNA, membalikkan transkripsi ke qPCR

Mengawal deteksi lncRNA Anda secara komprehensif

berita723 (3)

RNA Total Hewan IsolatKit (dengan kolom penghapusan gDNA)

berita723 (4)

Sel Total RNA IsolatKit (dengan kolom penghapusan gDNA)

berita723 (5)

Lnc-RT HeroTM I(Dengan gDNase)(Super Premix untuk sintesis cDNA untai pertama dari lncRNA)

berita723 (6)

PCR Real Time EasyTM-SYBR Hijau I

Akeuntungan ofEkstraksi RNA:

Kit ini menggunakan teknologi ekstraksi RNA generasi ketiga, tidak perlu menggunakan DNase.

11 menit dari sel kultur pelat 96, 24, 12, dan 6 sumur, ekstraksi efisiensi tinggi RNA sel total bebas gDNA, kemurnian tinggi, dan berkualitas tinggi.

Keuntungan transkripsi balik lncRNA:

Sistem transkripsi balik yang dikembangkan secara khusus untuk LncRNA untuk menghilangkan kontaminasi DNA genomik dengan cepat.

Sistem transkripsi balik memiliki stabilitas termal yang tinggi dan masih memiliki kinerja transkripsi balik yang baik pada suhu 50°C.

Templat dengan konten GC tinggi dan struktur sekunder yang kompleks dapat dibalik dengan efisiensi tinggi.

Keuntunganof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase memiliki efisiensi amplifikasi yang lebih tinggi, sensitivitas amplifikasi yang lebih tinggi, dan spesifisitas amplifikasi yang lebih tinggi

Real PCR Easy Mix yang dioptimalkan membuat SYBR Green I memiliki sensitivitas deteksi yang lebih tinggi, dan intensitas fluoresensinya 3-5 kali lipat dari produk serupa, yang dapat memenuhi kebutuhan berbagai jenis eksperimen kuantitatif fluoresensi.


Waktu posting: Jul-23-2021